Análisis de la expresión diferencial del proteoma de Rhiz opus oryzae ENHE bajo condiciones de estrés en presencia y ausencia de pentaclorofenol 上市 Deposited
En este trabajo se utilizó al zigomiceto, Rhizopus oryzae, que fue aislado de un aserradero en Puebla a partir de suelo contaminado con pentaclorofenol (PCF), un xenobiótico de alta persistencia y toxicidad que se encuentra en el medio ambiente. Se ha demostrado que este hongo produce enzimas especializadas, involucradas en la degradación de tóxicos provenientes de efluentes industriales, entre ellos el PCF. En el presente trabajo se realizó un análisis de expresión diferencial de las proteínas intracelulares de R. oryzae , al crecer al hongo en presencia y ausencia de PCF con la finalidad de identificar las proteínas que se estén expresando en presencia del PCF y tratar de relacionarlas con los metabolitos encontrados producto de su degradación. Mediante la utilización de la técnica de electroforesis bidimensional para la separación de las proteínas, se obtuvo el perfil proteómico de ambas condiciones analizadas. Se realizó el análisis de los perfiles obtenidos con el software PDQuest y se escindieron los spots que se expresaron solo cuando era adicionado PC F al medio de cultivo y algunos que se dejaban de expresar después de ser adicionado el contaminante, posteriormente se mandaron a analizar con la técnica de espectrometría de masas MS/MS para su secuenciación y posterior identificación de las proteínas. De las proteínas que se identificaron correspondientes a aquellos spots que solo se expresaron cuando se adicionaba el PCF al medio de cultivo, se encontró que la mayoría estaba relacionada con la respuesta al estrés que provoca el contaminante en el microorganismo, además de algunas enzimas con actividad oxidorreductasa que posiblemente podrían estar relacionadas con la formación de un metabolito producto de degradación del PCF, el pentacloroanisol que ya ha sido identificado con anterioridad. Se demostró por qué el hongo deja de crecer al momento de adicionar el PCF al medio de cultivo, ya que los spots que se dejan de expresar al momento de adicionar el contaminante corresponden a proteínas involucradas en el metabolismo energético del hongo. Cabe reiterar que se encontraron más de una proteína por spot, por lo que es recomendable realizar en estudios posteriores geles de 13 centímetros con la finalidad de obtener una identificación de las proteínas con una mayor precisión.
We study Rhizopus oryzae ENHE, a zigomycete isolated of a sawmill industry of Puebla in which floors are contaminated with pentachlorophenol (PCP), one of xenobiotics with main persistence and toxicity present in environment. This fungus produce enzymes involves in the degradation of xenobiotic toxics derived from waster water industry like PCP. In this work, we analyze the differential expression of intracellular proteins from R. oryzae ENHE, which was cultivated in the absence and presence of PCP. The aim of analysis was to identify the expression of proteins associated to the presence of PCP and related them with the generated metabolites resulting from the xenobiotic degradation. The proteomic profile of both conditions was performed with 2D -electrophoresis assays. The profiles were analyzed by PDQuest software and the identified spots expressed only under the presence of PCF were cleaved. We also isolated several spots that were s uppressed in the presence of the pollutant. The identification of these proteins was achieved by mass spectrometry sequencing. It was found that the expressed proteins with PCP are related to stress response induced by the pollutant over the microorganis m. We also identify some oxidoreductases enzymes probably related with the metabolites generation of PCP degradation. Moreover, the suppressed proteins in the presence of PCP correspond to enzymes involved in the energetic metabolism of fungus; strongly su ggesting that their lost probably induce to this organism turns to the lag phase. For the relevance to comment is that we found more than a protein to each one spot, therefore, it is recommended for later studies the employ of 13 cm gels in order to separate the proteins in 2D -electrophoresis with better resolution.
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