Purificación y caracterización bioquímica de las toxinas producidas por Vibrio vulnificus 上市 Deposited
Desde que fue reportado por primera vez por el Centro de Control de Enfermedades (CDC) en 1976, Vibrio vulnificus ha sido objeto de numerosos estudios al ser relacionado con enfermedades causadas por la ingesta de productos de la pesca. Se han asociado diversos factores a la virulencia de V. vulnificus tales como la presencia de una hemolisina y una citolisina con masas moleculares relativas (Mr) de aproximadamente 36 y 56 kDa, respectivamente. Por lo anterior, se consideró importante realizar la purificación y la caracterización bioquímica de estas dos toxinas en aislados mexicanos. Se verificó la identidad de las especies de 211 cepas aisladas de ostiones y pescado, confirmándose que 27 cepas pertenecían a la especie vulnificus, de las que se obtuvo la toxina y se determinó el efecto citotóxico en la línea celular CHO. Se observó a las 10 horas de incubación que tres de las cepas destruyeron entre 20 y 40% de la monocapa, 18 cepas mostraron entre 40 y 60% de destrucción, dos entre 60 y 80% y cuatro entre 80 y 100%. En todos los casos se observó un efecto citotóxico caracterizado por la elongación de las células CHO. Mediante precipitación diferencial salina y electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de SDS, se observó que la mayoría de las muestras estaban constituidas por diferentes proteínas. Este comportamiento no fue el mismo en todas las muestras ya que hubo tres con una sola banda de proteína a concentración de saturación del 50%, con estas tres muestras se realizó nuevamente precipitación y electroforesis, con la finalidad de apreciar a qué porcentaje de saturación se observa claramente la banda de interés (36 o 56 kDa). Se encontró que las masas determinadas para la precipitación al 45 y 50% de saturación fueron muy similares (60.4 y 60 kDa, respectivamente), sin embargo, la actividad citotóxica y la proteína mostraron acumulación en la fracción precipitada al 50% de saturación con sulfato de amonio y corresponden a la masa reportada para citolisina. Esta muestra fue caracterizada por electroforesis bidimensional obteniéndose un pI cercano a 5. Un enfoque isoeléctrico en gel de poliacrilamida permitió asignar al pI un valor de 4.6. La importancia de esta investigación radica en que se determinaron algunas características bioquímicas (Mr, pI) de una toxina de V. vulnificus obtenida de productos de la pesca de las Costas del Golfo de México.
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