Estudio de las enzimas fenoloxidasas, proteasas y peroxidasas presentes en Rhizopus oryzae ENHE Public Deposited
El objetivo del presente trabajo fue estudiar tanto a nivel extra como intracelular,las proteasas (ácidas, neutras y alcalinas), fenoloxidasas (lacasa y tirosinasa) y peroxidasas(manganeso y lignina peroxidasa) presentes enRhizopus oryzae ENHE elcual es un hongo filamentoso que tiene la característica de crecer en ambientes contaminados con xenobióticos como el pentaclorofenol (PCF), por lo cual el estudio de su sistema enzimático es de gran utilidad para desarrollos biotecnológicos posteriores. R. oryzae ENHE se creció en medio Lee regulado con amortiguador de citratos 0.1M pH 5.8 a 30°C y 150 rpm; bajo tales condiciones, alcanzó su máxima producción de biomasa a partir de las 24 horas, tomándose muestra desde este tiempo hasta las 96 horas. En estos tiempos de estudiose logró cuantificar a nivel intracelular proteasas ácidas, neutras y alcalinas; en el medio extracelular se cuantificó proteasas ácidas, neutras, alcalinas y lignina peroxidasa. La actividad lignina peroxidasa pudo ser cuantificada hasta las 48 h. Sin embargo, al adicionar 0.1g L-1 alcohol veratrílico al inicio de la fermentación, esta actividad logró ser cuantificada durante toda la cinética. Debido a la actividad metabólica que presenta dicha enzima, no se descarta su participación en la remoción del PCF. Las proteasas regulan los niveles proteicos de la célula, por lo que, detectar las proteasas que regulan a la o las enzimas de interés mediante inhibidores específicos, podría contribuir a elevar los niveles de remoción del PCF. En este trabajo se logró identificar posibles aspartato, serín y cisteín proteasas tanto en extractos extra como intracelulares. En los extractos intracelulares que se sometieron a zimografía se detectó actividad fenoloxidasa al visualizarse una banda a 203kDa que reaccionó con L-DOPA, sin embargo, no se puede afirmar que sea producto de actividad tirosinasa, ya que con métodos espectrofotométricos y zimogramas con MBTH y tirosina, el resultado fue negativo.
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