Efecto de la glicina sobre la vía de activación de NFkB y su regulación en adipocitos 上市 Deposited
Introducción: la obesidad ha aumentado de forma significativa en los últimos años y se considera uno de los principales problemas de salud pública a nivel mundial. Durante su desarrollo se presenta una respuesta inflamatoria crónica de bajo grado que genera la activación del factor nuclear kappa B (NF-κB) y la transcripción de genes que codifican para citocinas proinflamatorias, factores de crecimiento y proteínas de fase aguda. Recientemente se ha demostrado que la glicina, un nutriente antioxidante, y protector celular, bloquea el proceso inflamatorio generado por la actividad de macrófagos y adipocitos, los que liberan potentes mediadores proinflamatorios, como factor de necrosis tumoral alfa TNF-α, Interleucina 6 (IL-6) y leptina. Además la glicina posee actividad quimioprotectora debido a que reduce eficazmente los niveles séricos de citocinas proinflamatorias y aumenta los niveles de citocinas antiinflamatorias en células 3T3-L1. También se ha demostrado que el tratamiento con glicina disminuye la expresión y secreción de adipocinas proinflamatorias en ratones obesos inducidos con glutamato monosódico (GMS/Ob). Recientemente se ha postulado que estos efectos están relacionados con la reducción en la activación del NF-κB, este factor de transcripción es esencial para la respuesta inflamatoria. Blancas y col. (2012) reportaron que la glicina inhibe la activación de NF-κB, inducida por el TNF-α, mediante un mecanismo que implica un aumento parcial de IκB-α. En estas condiciones, la glicina suprimió también la expresión de TNF-α e IL-6. En este sentido, la presente investigación se enfoca en estudiar cuál es el nivel de regulación de la glicina sobre la vía de señalización canoníca de TNF-α que activa NF-κB y su asociación con la modulación en la secreción de citocinas.
Objetivo general: determinar si el punto de acción de la glicina en la vía de activación de NF-κB por TNF-α es a nivel de la IKK-α, inhibiendo su actividad y regulando la liberación de citocinas proinflamatorias en adipocitos. Material y métodos: para evaluar el efecto de la glicina en adipocitos se utilizó la línea celular 3T3-L1 (fibroblastos de ratón diferenciados a adipocitos); las células fueron incubadas con TNF-α (5 ng/mL) durante 30 min (control positivo), BAY (3-[(4- metilfenil)sulfonil]-(2E)-propenonitrilo) (10µM, un inhibidor de NF-κB) durante 30 min (control negativo) y pretratamientos con glicina (10 mM) a los 15, 30, 45 min, 1, 2 y 4 h, seguidos de un estímulo de TNF-α (5 ng/mL durante 30 min). Se realizó la extracción de proteína nuclear y citoplasmática para su cuantificación y análisis. Se aplicó la técnica del Western Blot para la detección de la proteína IKK-α. Por el método de ELISA se midió la secreción de TNF-α y leptina. Se realizó EMSA para medir la activación de NF-κB. Los datos se analizaron mediante un análisis de varianza seguido de la prueba de Tukey-Kramer, con un nivel de significancia del 95%. Resultados: la proteína IKK-α está regulada por la acción de glicina, generando un efecto transitorio al elevar y disminuir la activación de NF-κB a diferentes tiempos. El pretratamiento con glicina (de 15 min hasta la 2 h) redujo la secreción de TNF-α. Sin embargo, a las 4 h aumenta la secreción de TNF-α como un efecto secundario, pero que no genera mayor actividad de NF-κB. De igual manera, se observó que el pretratamiento con glicina (a 15, 30, 45 min y 2 h) redujo la secreción de leptina y a 1 y 4 h se elevó significativamente hasta llegar a un estado basal parecido al control. Conclusión: la glicina inhibe la activación de NF-κB inducida por TNF-α, por una cascada de fosforilaciones que implican la activación de IKK-α e IκB-α, regulando la expresión y secreción de moléculas con carácter proinflamatorio, como TNF-α y leptina. Estos resultados apoyan la idea de que la glicina podría estar regulando el proceso inflamatorio crónico característico de la obesidad a través de un mecanismo que involucra la participación de estos mediadores.
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