La esfingosina 1-fosfato (S1P) como mediador de los efectos biológicos de la hormona luteinizante (LH) en células de la teca de bovino Public Deposited
La esfingosina 1-fosfato (S1P) es un esfingolípido implicado en procesos de esteroidogénesis, sobrevivencia y proliferación celular. El objetivo de este trabajo fue reconocer el papel de la S1P como mediador de los efectos biológicos de la hormona luteinizante (LH) en células de la teca de bovino. Células de la teca fueron cultivadas en medio MacCoys 5a modificado por 96 horas (37°C, 5% CO2 y 95% de humedad) con 0, 0.1, 1 y 10 ng/mL de LH, siendo las dosis bajas de LH (0.1 y 1 ng/mL) las que promueven la viabilidad celular (P <0.05). Adicionalmente, se cuantificó en el medio de cultivo la concentración de S1P por la técnica de ELISA, demostrando que la dosis de 0.1 ng/mL de LH estimula una mayor concentración de S1P (P <0.05), esta dosis fue elegida como ideal para los subsecuentes experimentos. Por otro lado, se identificó por Western Blot la presencia de la esfingosina cinasa 1 fosforilada (SK1p) en células de la teca. Para determinar el papel de S1P como mediador de LH en los efectos de viabilidad celular y esteroidogénesis. Se realizaron cultivos de células de la teca a los que se les adicionó un inhibidor de la esfingosina cinasa 1 (SKI-178) en presencia o ausencia de 0.1 ng/mL de LH. La viabilidad celular se determinó por la técnica de MTT y se observó un incrementó en presencia de 0.1 ng/mL de LH y una reducción en presencia del SKI-178 (P <0.05). En cuanto a los efectos esteroidogénicos, se cuantificó la concentración de progesterona y testosterona por la técnica de ELISA. La síntesis de progesterona tiende a incrementar con 0.1 ng/mL de LH (P=0.09), mientras que en presencia del SKI-178 disminuyó marcadamente su síntesis (P <0.05). En conclusión, en este trabajo se determina por primera vez, que la LH estimula la síntesis de S1P en células de la teca y, además, se reconoce el papel de este esfingolípido bioactivo como mediador de LH en la viabilidad celular y síntesis de progesterona en células de la teca de de bovino en cultivo.
Sphingosine 1-phosphate (S1P) is a sphingolipid involved in processes of steroidogenesis, survival and cell proliferation. The aim of this work was to recognize the role of S1P as mediator of the biological effects of luteinizing hormone (LH) on bovine theca cells. Theca cells were grown for 96 hours in modified McCoys 5a medium (37°C, 5% CO2 and 95% humidity) with 0, 0.1, 1 and 10 ng/mL LH, where low doses of LH (0.1 and 1 ng/mL) were shown to promote cellular viability (P <0.05). In addition, the culture medium was quantified by the concentration of S1P by the ELISA technique, demonstrating that the dose of 0.1 ng/mL of LH stimulates a higher concentration of S1P (P<0.05), so the dose of 0.1 ng/mL was chosen as an ideal dose for subsequent experiments. On the other hand, the presence of sphingosine kinase 1 phosphorylated (SK1p) in theca cells by Western Blot is identified. To determine the role of S1P as an LH mediator in the effects of cell viability and steroidogenesis, theca cell cultures were performed to which a sphingosine kinase 1 inhibitor (SKI-178) was added in the presence or absence of 0.1 ng/mL of LH. Cell viability was determined by the MTT technique, where the viability was observed to increase in the presence of 0.1 ng/mL LH and reduced in the presence of SKI-178 (P<0.05). As for the steroidogenic effects, the concentration of progesterone and testosterone was quantified by the ELISA technique. Progesterone synthesis tends to increase after the stimulus of 0.1 ng/mL LH (P=0.09), while in the presence of SKI-178 sharply decreases synthesis (P<0.05). Finally, the concentration of testosterone was not modified after the addition of 0.1 ng/mL of LH (P=0.41), while only using the SKI-178, increased the concentration of this hormone (P<0.05). In conclusion, this work determines for the first time, the synthesis of S1P in LH stimulus theca cells and further recognizes the role of S1P as an LH mediator in cell viability and progesterone synthesis in cultured bovine theca cells.
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