El papel del glutatión reducido (GSH) en la capacitación espermática y su relación con la fertilización in vitro en espermatozoides de cerdo sus Scrofa Domesticus Pubblico Deposited
In TRA that seek to preserve sperm quality, GSH has been used as an antioxidant, trying to extend the lifespan of the male gamete. Although ROS cause cell damage, it is also clear that they play an important physiological role in sperm during SC which in turn affects fertilization. Therefore it is necessary to maintain a certain balance of both antioxidants and oxidants so that the SC is carried out correctly. The purpose of this study was to add determining if different concentrations of GSH during sperm capacitation in vitro fertilization porcine oocyte is modified. During SC, the relevant role of GSH has been demonstrated, reporting that at concentrations of 1 mM an adequate percentage of trained sperm is obtained, while at other concentrations, the training process is affected; this allows us to suppose that the GSH is an important SC regulator, For what is important to analyze, if the concentration of GSH administered during training, can modify IVF. For the methodology, a seminal analysis of the semen sample was first performed, evaluating viability, morphology concentration and mobility. subsequently the SC was performed for it took 5 mL of sample and was diluted and washed in DPBS, then it was placed in the middle apacitante c and incubated for 2 and 4 h with different concentrations of GSH to be evaluated (0, 0.5, 1 and 5 mM). For oocyte maturation, and punctured s ovaries of prepubertal bristle collecting oocytes, these were placed in maturation medium and incubated for 44h. Finally for fertilization , the matured oocytes were stripped for insemination with previously trained spermatozoa and determining different parameters such as: SC time and coincubation, fertilization medium: TBMm and TALP-HEPES, evaluate the IVF with the different concentrations of GSH (0, 0.5, 1 and 5 mM) and finally the coincubation of both gametes in GSH washed sperm. For the evaluation of SC time and coincubation it was found that at 2h of SC plus 4h of coincubation a percentage between 50 to 60% of IVF is obtained, unlike 4 h of SC and 2h of coincubation where the percentage was 0%. In the media evaluation, it was found that the TBMm had 53% IVF whereas in TALP-HEPES, 47% IVF was obtained without determining differences. For the washing of the sample, 53% of IVF were obtained in sperm without an additional wash, while those that were washed, the percentage of IVF was 0%. For the evaluation of IVF with the different concentrations of GSH, it was obtained in the concentration of 0.5, 1 and 5 mM a percentage of 42, 56 and 0% respectively of IVF obtaining higher percentages in the concentration of 1 mM. And finally for the coincubation of gametes with the different concentrations of GSH, a percentage of 54, 39 and 4% respectively of IVF was obtained in the concentration of 0.5, 1 and 5 mM, obtaining higher percentages in 0.5 without the concentration of 1 mM. it does not show differences. This work had several difficulties, however, important results were obtained that can lead to more detailed studies of the oxidation-reduction process during SC. Key words: glutathione, sperm capacitation, in vitro fertilization, reactive oxygen species.
En las TRA que buscan conservar la calidad espermática se ha utilizado el GSH como antioxidante, intentando alargar la vida útil del gameto masculino. A pesar de que las ERO generan un daño celular, también es claro que juegan un papel fisiológico importante en el espermatozoide durante la CE lo que a su vez afecta la fertilización. Por ello es necesario mantener un determinado balance tanto de antioxidantes como oxidantes para que la CE se lleva a cabo de forma correcta. El objetivo del siguiente trabajo fue determinar si al adicionar diferentes concentraciones de GSH durante la capacitación espermática se modifica la fertilización in vitro de ovocitos porcinos. Durante la CE, se ha demostrado el papel relevante del GSH, reportando que a concentraciones de 1 mM se obtiene un porcentaje adecuado de espermatozoides capacitados, mientras que, a otras concentraciones, el proceso de capacitación se ve afectado; esto nos permite suponer que el GSH es un importante regulador de la CE, por lo que es importante analizar, si la concentración de GSH administrada durante la capacitación, puede modificar la FIV. Para la metodología primero se realizó un análisis seminal de la muestra de semen evaluando viabilidad, concentración morfología y movilidad. posteriormente se realizó la CE, para ello se tomó 5 mL de muestra y fue diluida y lavada en DPBS, posteriormente fue colocada en medio capacitante e incubados por 2 y 4h con las diferentes concentraciones de GSH a evaluar (0, 0.5, 1 y 5 mM). Para la maduración de ovocitos, se puncionaron ovarios de cerdas pre-puberes colectando los ovocitos, estos fueron colocados en medio de maduración e incubados por 44h. Finalmente para la fertilización, los ovocitos madurados se desnudaron para su inseminación con espermatozoides previamente capacitados y determinando diferentes parámetros como: tiempo de CE y coincubación, medio de fertilización: TBMm y TALP-HEPES, evaluar la FIV con las diferentes concentraciones de GSH (0, 0.5, 1 y 5 mM) y finalmente la coincubación de ambos gametos en GSH lavado de espermatozoides. Para la evaluación del tiempo de CE y coincubación se encontró que a 2h de CE más 4h de coincubación se obtiene un porcentaje entre el 50 al 60% de FIV a diferencia de 4 h de CE y 2h de coincubación donde el porcentaje fue del 0%. En la evaluación de medios se encontró que el TBMm tuvo un 53% de FIV mientras que en TALP-HEPES se obtiene un 47% de FIV sin determinarse diferencias. Para el lavado de la muestra se obtuvo un 53% de FIV en espermatozoides sin un lavado adicional mientras que los que si fueron lavados el porcentaje de FIV fue del 0%. Para la evaluación de la FIV con las diferentes concentraciones de GSH se obtuvo en la concentración de 0.5, 1 y 5 mM un porcentaje del 42, 56 y 0% respectivamente de FIV obteniendo porcentajes más altos en la concentración de 1 mM. Y finalmente para la coincubación de gametos con las diferentes concentraciones de GSH se obtuvo en la concentración de 0.5, 1 y 5 mM un porcentaje del 54, 39 y 4% respectivamente de FIV obteniendo porcentajes más altos en 0.5 sin embrago la concentración de 1 mM no muestra diferencias. Este trabajo tuvo diversas dificultado sin embargo se obtuvieron resultados importantes que pueden conducir hacia estudios más minuciosos del proceso de oxido-reducción durante la CE. Palabras clave: glutatión, capacitación espermática, fertilización in vitro, especies reactivas del oxígeno.
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