La esfingosina 1-fosfato (S1P) como mediador de los efectos biológicos de la hormona folículo-estimulante (FSH) en células de la granulosa de bovino Público Deposited
Follicle-stimulating hormone (FSH) is a glycoprotein that promotes the development of antral follicles through the proliferation, survival and steroidogenesis of granulosa cells (GC). In addition, it has been shown to stimulate the synthesis of sphingolipids such as sphingosine 1-phosphate (S1P) in these cells. Similar to FSH, S1P promotes proliferation, survival and steroidogenesis in various cell types. The objective of this work was to demonstrate that S1P mediates the viability and steroidogenesis effects of FSH in bovine GC. 75,000 GC of follicles between 4-7 mm in diameter were cultured in modified McCoy's 5A medium (37°C, 5% CO2 and 95% humidity) in the presence of 1ng/mL FSH, 10µM SKI-178 and a combination of both for 48 hrs. S1P and estradiol concentrations in the culture medium were determined by ELISA assay. In the cells, the viability of GC in culture was determined by MTT technique. With the present thesis it was proved that FSH increased the synthesis of S1P (P<0.05), while the addition of the inhibitor (SKI-178) reduced its concentration. On the other hand, it was shown that the addition of 1 ng/mL FSH increased the number of viable granulosa cells (P<0.05), whereas the viability of these cells was reduced in combination with SKI-178 or the inhibitor alone. Finally, FSH increased estradiol synthesis in the culture medium (P<0.05), however, FSH in the presence of SKI-178 and inhibitor alone also increased its synthesis with respect to the control (P<0.05). In conclusion, it is corroborated that FSH participates as an inducer of S1P synthesis in cultured bovine GC through SK1 activation, that this sphingolipid mediates FSH-induced viability effects and that it probably does not mediate the steroidogenic effects exerted by FSH on GCs.
La hormona folículo-estimulante (FSH), es una glicoproteína que promueve el desarrollo de folículos antrales a través de la proliferación, sobrevivencia y esteroidogénesis de células de la granulosa (CG). Además, se ha demostrado que en estas células estimula la síntesis de esfingolípidos como esfingosina 1-fosfato (S1P). De manera similar a FSH, la S1P favorece la proliferación, sobrevivencia y esteroidogénesis en diversos tipos celulares. El objetivo de este trabajo fue demostrar que S1P es mediador de los efectos de viabilidad y esteroidogénesis de FSH en CG de bovino. Se cultivaron 75,000 CG de folículos entre 4-7 mm de diámetro en medio McCoy´s 5A modificado (37°C, 5% de CO2 y 95% de humedad) en presencia de 1ng/mL de FSH, 10µM de SKI-178 y una combinación de ambos durante 48 hrs. Se determinaron las concentraciones de S1P y estradiol en el medio de cultivo por el ensayo de ELISA. En las células se determinó mediante la técnica de MTT la viabilidad de CG en cultivo. Con la presente tesis se comprobó que FSH incrementó la síntesis de S1P (P<0.05), mientras que la adición del inhibidor (SKI178) redujo su concentración. Por otro lado, se demostró que la adición de 1 ng/mL de FSH incrementó el número de células de la granulosa viables (P<0.05), en tanto que la viabilidad de estas células se redujo en combinación con SKI-178 o el inhibidor solo. Finalmente, la FSH aumentó la síntesis de estradiol en el medio de cultivo (P<0.05), sin embargo, la FSH en presencia de SKI-178 y el inhibidor sólo también incrementaron su síntesis respecto al control (P<0.05). En conclusión, se corrobora que FSH participa como un inductor de la síntesis de S1P en CG de bovino en cultivo a través de la activación de SK1, que este esfingolípido es mediador de los efectos de viabilidad inducidos por FSH y que probablemente no media los efectos esteroidogénicos que ejerce FSH sobre las CG.
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