Evaluación de la participación de los receptores metabotrópicos P2Y2 y P2Y4 en la señalización activada por ATP en células precursoras neuronales del epitelio olfatorio Public Deposited
Las células multipotentes son un tipo importante de células troncales, las cuales tienen la capacidad de autorrenovar su población indiferenciada al dividirse y su progenie se diferencia en múltiples tipos de células en un tipo de tejido u órgano especifico. En particular, las células precursoras neuronales (NPCs) del epitelio olfatorio (EO) proliferan, migran y se diferencian para reemplazar a las células que mueren en eventos que dañan el epitelio. Las NPCs del EO humano han sido aisladas y propagadas en cultivos celulares para estudiar diversos procesos dependientes de la señalización de Ca2+, en particular la vía purinérgica. El objetivo de este trabajo fue determinar la expresión de los receptores purinérgicos P2Y2 y P2Y4 funcionales en las NPCs con rasgos de multipotencialidad obtenidas del EO humano. En el presente estudio, se determinó por inmunofluorescencia que en un cultivo clonal de NPCs, los receptores purinérgicos P2Y2 y P2Y4 son expresados en las células troncales que coexpresan marcadores moleculares de multipotencia tales como las proteínas nestina, musashi-1 y SOX2. Adicionalmente, se confirmó la funcionalidad de estos receptores por microfluorometría al evaluar la activación de los purinoceptores con ATP y medir la concentración citosólica de Ca2+ en las NPCs. Los resultados sugieren que el cultivo clonal está constituido por células troncales con rasgos de multipotencia; además, que estas células expresan receptores purinérgicos funcionales P2Y2 y P2Y4.
Multipotent cells are an important type of stem cell, can self-renew their undifferentiated population and their progeny differentiate into multiple cell types in a specific tissue or organ type. Particularly, neural precursor cells (NPCs) in the olfactory epithelium (EO) proliferate, migrate, and differentiate to replace died cells during epithelial-damaging events. NPCs of human EO have been isolated and propagated in cellular cultures to study different processes that are dependent on Ca2+ signaling, particularly the purinergic pathway. The objective of this work was to determine the expression of functional P2Y2 and P2Y4 purinergic receptors in NPCs with multipotentiality traits obtained from human EO. In the present study, it was determined by immunofluorescence that in a clonal culture of NPCs, the purinergic receptors P2Y2 and P2Y4 were expressed in stem cells that express multipotency molecular markers such as nestin, musashi-1 and SOX2 proteins. Additionally, the functionality of these metabotropic receptors was confirmed through evaluation of purinoceptors activation with ATP in NPCs by measurement of cytosolic Ca2+ concentration by microfluorometry. Results suggest that stem cells in the clonal culture co-expressed multipotency traits and functional P2Y2 and P2Y4 purinergic receptors.
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