Evaluación de la viabilidad, maduración y efecto genotóxico en ovocitos y células del cúmulo porcinos expuestos a sulfonato de perfluorooctano (PFOS) in vitro Pubblico Deposited
El PFOS es un producto sintético, su bioacumulación en los seres humanos altera el metabolismo y la homeostasis del colesterol; en mujeres con altas concentraciones plasmáticas de PFOS disminuyó la tasa de embarazos y en hombres, se relaciona con problemas en la calidad del semen. Estudios recientes indican que el PFOS puede causar daño en la integridad del ADN de células somáticas y espermatozoides, pero no existen estudios que demuestren este efecto en gametos femeninos. Por consiguiente, el objetivo de este estudio fue determinar el efecto del PFOS en la viabilidad, la maduración in vitro (MIV) y la integridad del ADN mediante el ensayo cometa, tanto en ovocitos como en células del cúmulo (CC) expuestos a este compuesto durante la MIV. Los complejos ovocitos-células del cúmulo (COCs) se obtuvieron por punción folicular de ovarios de cerdas prepúberes. La MIV se llevó a cabo en medio TCM-199 suplementado con diferentes concentraciones (0, 12.5, 25, 50, 100, 150 y 200 µM) de PFOS durante 44 h. La viabilidad de los ovocitos, se determinó mediante la tinción con MTT y la de las CC con azul tripano. Para evaluar la MIV, los ovocitos se tiñeron con Bisbenzamide (Hoechst 33258), observando la presencia de la metafase II y el primer cuerpo polar. Para detectar el efecto genotóxico, se realizó el ensayo cometa con una concentración subletal del compuesto (23 µM) utilizando como control positivo H₂O₂ (200 µM). Previamente se descartó el efecto del diluyente (DMSO 1%). En este estudio se determinó que la concentración letal 50 (CL₅₀) para los ovocitos fue de 31 µM y para las células del cúmulo fue de 90 µM. La concentración de inhibición de la maduración 50 (CIM₅₀) fue de 11 µM. Para determinar el efecto genotóxico se evaluaros tres parámetros: número de céluas con daño, longitud de las caudas y el porcentaje de ADN en caudas. Los resultados indican que en las CC un ¼ de la CL₅₀ (23 µM) presentó un efecto genotóxico significativo en dos parámetros evaluados: mayor número de células con daño y longitud de caudas de las mismas. En los ovocitos no se pudo determinar el efecto genotóxico. Los datos obtenidos muestran el efecto adverso del PFOS en la maduración, la viabilidad y la integrdad del ADN. Las concentraciones empleadas en este estudio están dentro del rango reportado en condiciones fisiológicas en trabajadores laboralmente expuestos (26 µM de PFOS). Se requiere modificar las técnicas del ensayo cometa en ovocitos que permitan evaluar el efecto genotóxico.
PFOS is a synthetic product; its bioaccumulation in humans alters metabolism and cholesterol homeostasis. In women with high plasma concentrations of PFOS, pregnancy rates are decreased and in men, are related to problems in semen quality. Recent studies indicate that PFOS can damage DNA integrity in somatic cells and sperm, but there are no studies that demonstrate this effect in female gametes. Therefore the aim of the present study was to determine the effect of PFOS on viability, in vitro maturation (IVM) and DNA integrity by the comet assay in oocytes and cumulus cells (CC) exposed to this compound during IVM. Complex oocytecumulus cells (COCs) were obtained by puncturing ovarian follicles of prepubertal sows. IVM was performed in TCM-199 medium supplemented with different concentrations of PFOS (0, 12.5, 25, 50, 100, 150 and 200 µM) for 44 h. The oocyte viability was determined by MTT staining and CC by trypan blue. To evaluate IVM, oocytes were stained with Bisbenzamide (Hoechst 33258) to observe oocytes in metaphase II and the first polar body. Before all evaluations, the effect of diluent (1% DMSO) was discarded. To evaluate the genotoxic effect, the comet assay was performed. It was used a sublethal concentration of the compound (23 µM) and as a positive control H₂O₂ (200 µM). In this study it was determined that the lethal concentration 50 (LC₅₀) for oocytes was 31 µM and for CC was 90 µM. The concentration of maturation inhibition 50 (MIC₅₀) was 11 µM. To determine the genotoxic effect three parameters were evaluated: number of damaged cells, length tails and percentage of DNA in tails. The results indicate that in CC, ¼ of the LC₅₀ (23 µM) showed a significant genotoxic effect in two parameters: increased number of damaged cells and length tails. In oocytes, the use of the comet assay was unable to determine the genotoxic effect. Therefore, results obtained demonstrate the adverse effects of PFOS in viability, oocytes maturation and DNA integrity in CC. The concentrations used in this study are within the range reported in physiological conditions in occupationally exposed workers (26 µM PFOS). As perspective some adjustments are necessary to improve the comet assay in order to assess the genotoxic effect in oocytes.
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