Construcción de una mutante de la proteína 2c de pouovirus y evidencia sobre su función Public Deposited

El virus de la Poliomielitis está formado de una cadena sencilla de RNA de polaridad (+) de alrededor de 7,500 nucleótidos, que constituyen el genoma viral. Este RNA codifica una sola poliproteína que es proteolíticamente procesada durante la traducción para dar lugar a todas las proteínas virales. Las proteínas para la cápside viral se localizan en el extremo amino-terminal de la región P1. En la región central P2 se encuentra la proteasa viral 2A y dos proteínas de función desconocida 2B y 2C. Hacia el extremo carboxilo-terminal (P3) se localiza la polimerasa viral (3D), una proteasa (3C) y la proteína Vfg, que se encuentra unida por el extremo 5' al genoma viral. La proteína 2C ha sido poco estudiada. Sin embargo, mutaciones que producen resistencia y/o dependencia a Guanidina, un inhibidor de la replicación viral, se localizan en la región del genoma viral que codifica para 2C. Esta información ha sugerido que la proteína 2C se encuentra involucrada en la síntesis de RNA viral. El genoma de Poliovirus tipo I (Mahoney) ha sido clonado y secuenciado. La “infección" de célula en cultivo con el DNAc de Polioviru clonado en un plásmido de expresión eucariótica, ha permitido la producción de virus infeccioso. Estos hechos han abierto la posibilidad de construir mutantes en genes y sitios precisos, localizando de esta manera funciones virales es pecificas. En el presente trabajo, con la finalidad de estudiar la función de la proteína 2C, se construyó una mutante en la región del genoma viral que codifica para péptido. La estrategia general para la construcción se realizó mediane inserción de "linkers". La mutante construida denominada pSV-0-polio-M3 contiene un interés de 10pb en la posición 4826 del programa viral, lo que daría como resultado la inserción de tres aminoácidos en la proteína 2C, conservando la secuencia de los mismos a lo largo de la poliproteína. Para analizar el efecto de la mutación en las funciones virales, se realizaron transfecciones a cédula 293 con los plásmidos pSV-o- polio (Silvestre) y pSV-o-polio-M3 8mutante). Las transfecciones se llevaron a cabo por el método del fosfato de calcio. Se observó formación de virus infecciosos después de la transfección con Psv-o-polio. Sin embargo, no hubo producción de virus cuando las cédulas fueron transfectada con el plásmido mutante a 37 C ni tampoco a 32 C. Virus con resistencia y/o dependencia a Guanidina, presentan mutaciones en la región que codifica para 2C. Para analizar una posible dependencia a la droga, se realizaron transfecciones con la mutante construida en presencia del inhibidor. Tampoco hubo recuperación de virus en estas condiciones. No obstante, se observó producción de virus infecciosos cuando cédulas 293 fueron cotransfectadas con la mutante pSV-0-pol io-M3 y una subclona del DNAc de polio (pSV-23) que carece de le región P1 (que codifica para proteínas de cápside, pero mantiene la región para 2Cintacta y evidentemente no produce virus por sí mismo. Estos resultados surgieron que la proteína 2C es esencial para el crecimiento viral, puesto que 2C se encuentra altamente conservada entre picornavirus. L a inserción de tres aminoácidos pudo ser demasiado drástica para su fusión. La mutación pudo afectar su correcto procesamiento debido a alteraciones en la estructura secundaria de la poliproteína, o bien alterar sus sitios funciónale. Se sugiere que la mutación es letal específicamente para la replicación viral. Por otra parte, el hecho de que la transfección con pSV-o-polio-M3 y Psv-23 produzca virus infecciosos, puede ser explicado por un proceso de recombinación.

Relationships

In Administrative Set:	Tesis Posgrado

Descriptions

Attribute Name	Values
Creador	Núñez Valdez, María Eugenia
Contributors	Batancourt Rule, José Miguel Viniegra González, Gustavo Gutiérrez Ruiz, María Concepción Fernández Tomas, Carlos
Tema	Site-specific mutagenesis Poliomyelitis Biology, Experimental Biología experimental Proteins Proteína 2C Poliomielitis Mutagénesis de sitio específico 2C protein Proteínas
Editor	Universidad Autónoma Metropolitana
Idioma	spa
Keyword	Mutagénesis Poutovirus Caracterización molecular Proteína 2c Función proteica
Año de publicación	1989
Tipo de Recurso	info:eu-repo/semantics/masterThesis
Derechos	Acceso Abierto
División académica	Ciencias Biologicas y de la Salud
Línea académica	Biologia Experimental
Licencia	Atribucion-NoComercial 4.0 Internacional (CC BY-NC 4.0)

Last modified: 10/27/2026 Leer PDF

Items

Thumbnail	Date Uploaded	Visibility	Actions
	2026-10-27	Public	Press to Select an action Download