Estudio fisiológico de Pichia pastoris con diferentes concentraciones de glicerol: cultivo en medio sólido vs. cultivo en medio líquido Público Deposited
Las levaduras son los organismos eucariotas unicelulares más usados por industrias y laboratorios para obtener algún producto de interés. La levadura metilotrófica Pichia pastoris es una de ellas, esta levadura ha sido usada por más de 20 años para producir proteínas recombinantes y actualmente tiene una gran atención para humanizar proteínas con respecto a los vectores (Escherichia coli y Saccharomyces cerevisae) más usados en la industria y laboratorios, ya que posee procesos postraduccionales similares a los de los humanos. En este trabajo se caracterizó la fisiología de crecimiento y consumo de sustrato de P. pastoris CBS 7435 en cultivo en medio sólido (CMS) y cultivo en medio líquido (CML) con tres diferentes concentraciones de glicerol (25, 50 y 100 g/L); ambos sistemas de cultivo mostraron la misma producción de biomasa (11.7 ± 0.2 g/L) con 25 g/L de glicerol, asimilando todo el sustrato para generar biomasa. Se encontraron diferencias en la producción de biomasa entre ambos sistemas con glicerol >50 g/L, en el CMS fue superior en un 63% en glicerol con 50 g/L y 173 % superior en glicerol con 100 g/L, comparado con el CML. Por otra parte, a concentraciones superiores a 50 g/L de glicerol, el CMS fue más eficiente en el aprovechamiento de sustrato para generar biomasa, mientras que en el CML una parte del sustrato se usa para mantenimiento en las dos concentraciones evaluadas y al final de la fermentación existe glicerol remanente (20 % y 40 % con 50 g/L de glicerol y 100 g/L, respectivamente). Se observó diferencia en el crecimiento entre ambos sistemas: en el CMS se formaron agregados celulares en las trabéculas y en las capas delgadas de la espuma de poliuretano (PUF) mientras que en el CML las células se mantuvieron disgregadas en toda la fase líquida por la agitación orbital del matraz. Finalmente, se identificaron tres genes relacionados con el transporte de glicerol en P. pastoris CBS 7435 reportados en la base de datos del genoma de P. pastoris GS115. Este trabajo compara el sistema en CMS y CML, mostrando que el sistema en CMS es superior al CML para la producción biomasa y asimilación de sustrato, lo que sugiere que podría ser usado para la producción de altas densidades celulares.
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