Obtención de embriones de ovino por transferencia nuclear a partir de Fibroblastos de piel y ovocitos maduros in vitro con resveratrol Public Deposited
The aim of the present study was to evaluate the effects of different concentrations of resveratrol on ovine (Ovisaries) oocyte in vitro maturation (IVM) and subsequent embryonic development after handmade cloning (HMC). To determine the effects of resveratrol were evaluated four different concentrations (0, 0 .5, 2 and 5 M) on the nuclear maturation, reactive oxygen species (ROS) levels, as well as early embryonic development and morphological quality. After IVM, no significant difference was observed in maturation of the 0.5 and 2 M resveratrol groups (81.3 and 72.0%, respectively) compared with the control (0 M) (74.2%), but the 5 M resveratrol group showed significantly decreased nuclear maturation (56.0%) (P<0.05). Intracellular ROS levels in oocyte matured did not show significant differences between the groups (P>0.05). In subsequent embryonic development after HMC, no significant differences were observed in cleave d embryos between the groups (81.2, 84.4, 80.1 and 77.2%, respectively) (P>0.05). In 8 - 16 cell embryos, no significant differences were observed between the groups (65.6, 70.2, 64.3 and 63.6%, respectively) (P>0.05). In morulae, the 5 M group was significantly lower (6.8%) compared with 0, 0.5 and 2 M groups (32.8, 35.1 and 28.7%, respectively) (P<0.05). But, the 0.5 M resveratrol group had significantly higher morula compactation rates (10.7%) compared with 0, 2 and 5 M groups (6.2, 0 and 0%, respectively) (P<0.05). Morphological quality did not show significant differences in 8 - 16 cell embryos between the 1, 2, 3 and 4 quality (P>0.0 5). In morulae treated with 0.5 M had significantly less quality 4 (bad) embryos (4.7%) compared with 0, 2 and 5 M (23.8, 23.3 and 33.3%, respectively) (P<0.05), but with 5 M had significantly less quality 1 (excellent) embryos (0%) compare d with 0, 0.5 and 2 M (23.8, 30.1 and 23.3%, respectively) (P<0.05). In conclusion, resvetratrol supplementation on ovine oocyte IVM did not show significant differences in maturation rates and ROS levels. However, a treatment with 0.5 M during IVM, promoted the compactation of handmade cloned morulae and improved its quality. But with 5 M had significantly less IVM rates as well as embryonic development and quality. Keywords: Handmade cloning, Resveratrol, Ovine, In vitro maturation, Embryonic development.
En el presente trabajo se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de resveratrol en la maduración in vitro (MIV) de ovocitos de ovino (Ovisaries) y su impacto en el desarrollo temprano de embriones obtenidos por clonación manual o handmade cloning (HMC). Para cada concentración de resveratrol (0, 0.5, 2 y 5 M) se evaluaron la maduración nuclear y los niveles intracelulares de especies reactivas de oxígeno (ERO) en los ovocitos, así como e l desarrollo y la calidad morfológica de los embriones clonados. Transcurrido el tiempo de MIV, no se observó diferencia significativa (P>0.05) en el porcentaje de maduración de los ovocitos tratados con 0.5 y 2 M (81.3 y 72.0 %, respectivamente) comparados con el control (74.2 %), en tanto que a 5 M (56.0%) disminuyó significativamente (P<0.05). Al determinar las ERO intracelulares de los ovocitos madurados in vitro con resveratrol, no se observaron diferencia s significativas entre grupos (P>0.05). Durante el desarrollo embrionario, no se observaron diferencia s significativas (P>0.05) en los porcentajes de embriones divididos de cada grupo (81.2, 84.4, 80.1 y 77.2%, respectivamente), de igual forma, e n los embriones de 8 - 16 blastómeros no hubo diferencia significativa entre grupos (65.6, 70.2, 64.3 y 63.6%, respectivamente) (P>0.05). En las mórulas, a 5 M el porcentaje (6.8%) disminuyó significativamente (P<0.05) con respecto a 0, 0.5 y 2 M (32.8, 35.1 y 28.7%, respectivamente). A l determinar el porcentaje de mórulas compacta s, se observó que a 0.5 M fue de 10.7%, el cual fue significativamente mayor (P<0.05) que el control (6.2%), en tanto que a 2 y 5 M no hubo mórulas compactas. En la calidad morfológica de los embriones de 8 - 16 blastómeros, no se observaron diferencias significativa s (P>0.05) entre los porcentajes de embriones de calidad 1, 2, 3 y 4. En las mórulas tratadas con 0.5 M , el porcentaje de mórulas de calidad 4 (mala) (4.7%) fue significativamente menor (P<0.05) que a 0, 2 y 5 M ( 23.8, 23.3 y 33.3% , respectivamente) , en tanto que, a 5 M el porcentaje de las mórula s de calidad 1 (excelentes) fue significativamente menor (0%) comparado con 0, 0.5 y 2 M (23.8, 30.1 y 23.3% , respectivamente) (P<0.05). En conclusión, el resveratrol durante la MIV no aumentó significativamente la tasa de maduración nuclear, ni redujo los niveles intracelulares de ERO de los ovocitos. Sin embargo, el tratamiento con 0.5 M de resveratrol durante la MIV, promovió en el desarrollo de los embriones de ovino obtenidos por HMC, la compactación en las mórulas y mejoró su calidad. En tanto que, a 5 M, disminuyó el porcentaje de MIV de los ovocitos, así como el subsecuente desarrollo y calidad de los embriones. Palabras clave: Clonación manual, Resveratrol, Ovino, Maduración in vitro, Desarrollo embrionario.
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