Efecto de la hipoxia sobre la expresión del citocromo P450 CYP2S1 en células de cáncer de hígado Public Deposited
Los citocromos P450 son una familia de enzimas cuya principal función es biotransformar xenobióticos como fármacos y moléculas orgánicas por ejemplo eicosanoides y colesterol. La expresión de estas enzimas puede ser regulada en distintas circunstancias fisiológicas o patológicas como la hipoxia tumoral, la cual consiste en una disminución de la difusión de oxígeno debido al crecimiento excesivo y la angiogénesis irregular propia del tumor. Recientemente demostramos que la hipoxia favorece la sobreexpresión del citocromo CYP2S1 en la línea celular de cáncer de hígado HepG2. Sin embargo, el papel de la hipoxia sobre la expresión de este citocromo en líneas más agresivas de cáncer de hígado es desconocido. Objetivo. Determinar el efecto de la hipoxia sobre la expresión de CYP2S1 en células de cáncer de hígado en un modelo in vitro. Material y métodos. Las líneas celulares HepG2, Hep3B y SNU423 fueron cultivadas en una cámara anaeróbica a 1% de O2 durante 0, 6, 12, 18 y 24 horas. Se extrajo el ARN mediante TRizol y posteriormente se sintetizó el ADNc. Las muestras se analizaron por PCR-Tiempo Real mediante el método de 2-ΔΔCT. Mediante PCR punto final se analizó la presencia de la secuencia nucleotídica de la posible isoforma alternativa de CYP2S1. Además, mediante un análisis bioinformático, se modeló la estructura tridimensional de ambas isoformas del citocromo CYP2S1. Resultados. Los resultados preliminares sugieren que la hipoxia no tiene efectos sobre el ARNm de CYP2S1 en células Hep3B. Además proponemos que la hipoxia induce la transcripción de un ARNm que codifica para una isoforma alternativa de CYP2S1 en células HepG2. Finalmente, el modelo informático obtenido sugiere que la estructura tridimensional de las 2 isoformas es similar.
Background. Cytochromes P450 are a family of enzymes whose main function is to biotransform xenobiotics such as drugs and organic molecules like eicosanoids and cholesterol. The expression of these enzymes can be regulated in different physiological or pathological circumstances such as tumor hypoxia, which consists in a decrease of oxygen diffusion due to excessive growth and irregular angiogenesis. Recently, we demonstrated that hypoxia induces cytochrome CYP2S1 overexpression in the liver cancer cell line HepG2. However, the role of hypoxia on the expression of CYP2S1 in more aggressive cell lines of liver cancer is unknown. Objective. Determine the effect of hypoxia on CYP2S1 expression in liver cancer cells in an in vitro model. Material and methods. HepG2, Hep3B and SNU423 cell lines were cultured in an anaerobic chamber at 1% O2 for 0, 6, 12, 18 and 24 hours. RNA was extracted using TRizol and subsequently, cDNA was synthesized. The samples were analyzed by Real Time PCR using the 2-ΔΔCT method. Using endpoint-PCR we analyzed the presence of the possible alternative isoform of CYP2S1. Furthermore, we predicted the tridimensional structure of CYP2S1 using a bioinformatic analysis. Results: Preliminary results suggest that hypoxia has no effect on CYP2S1 mRNA in Hep3B cells. Furthermore, seems that hypoxia induces the transcription of the RNAm that codifies to an alternative isoform of CYP2S1 in HepG2 cells. Finally, we predicted that the tridimensional structures of the 2 isoforms are similar.
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