Determinación de patrones de inducción de lacasas en el hongo Trametes sp. EUM1 Public Deposited
Las lacasas son polifenoloxidasas (p difenol oxidasas), producidas por plantas, bacterias y hongos. Participan en procesos biológicos, tales como producción de pigmento y degradación de lignina, entre otros. Se utilizan en la industria para la degradación de compuestos fenólicos y lignina o en eliminación de compuestos tóxicos. Algunas lacasas son inducibles, ya que utilizan compuestos con estructuras muy similares a los sustratos de la enzima y que sirven como señal a la célula para que se produzcan. Se han extraído a partir de cultivos de microorganismos realizados en medios líquido y sólido. Los hongos del género Trametes, son considerados como parásitos de los bosques y algunos de ellos crecen en forma de laminas horizontales sobre la madera. En la presente investigación, se propago la cepa de Trametes sp. EUM1, en medio Kirk (medio definido) sólido con 2,2´ Azino-bis(ácido 3-etilbenzo-tiazolino-6-sulfónico) (ABTS) como sustrato para verificar la presencia de la enzima. En la determinación de la actividad Enzimática por halos de oxidación, se observó que la edad del micelio y el método de inoculación tienen efecto sobre la detección de las lacasas, teniendo mejores resultados con el micelio maduro y la inoculación con pellet. El crecimiento radial del hongo tuvo una velocidad radial aproximada de 0.1783 mm/h en el medio Kirk sin inductores. Los compuestos probados como posibles inductores fueron: alcohol veratrílico, ácido ferúlico, catecol, ácido tánico, ácido 3,4-dimetoxibenzoico o ácido verátrico, 2,6 dimetoxifenol, D-fenilalanina, ácido gálico, el sulfato de cobre a una concentración de 0.37 mM y sirigaldazina a concentración de 0.037 mM; se obtuvo que el sulfato de cobre y el alcohol veratrílico no tuvieron capacidad para inducir la actividad lacasa del hongo; mientras que el ácido tánico y el catecol inhibieron la producción de las lacasas; por otro lado, el ácido ferúlico y el ácido verátrico fueron los inductores más potentes y que no afectaron la velocidad radial de crecimiento. Estos dos compuestos se utilizaron en fermentación líquida sin agitación para ver el efecto de inducción en una cinética. Los resultados mostraron que al combinar la temperatura (39°C), un pH controlado (4.7-5.4) y con el ácido ferúlico, se obtuvieron extractos que mantienen el 85% de la actividad después de incubarse a 60°C durante una hora, debido a la producción de lacasas termotolerantes. Confirmando así que la producción de las lacasas cambian durante el proceso de crecimiento y los compuestos inductores tienen efectos distintos según la especie analizada.
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