Uno de los mayores problemas a los que se enfrenta elsector agrícola es mantener los cultivos libres de plagas. En busca de tener mayor rentabilidad y disminuir las pérdidas económicas que ocasionan estos organismos, los productores emplean técnicas que permitan disminuir estas poblaciones. La aplicación de plaguicidas químicos o biológicos ha generado buenos resultados, sin embargo, en algunos casos la sustentabilidad de los ecosistemas y la bioseguridad de los cultivos es afectada. Por ejemplo, los plaguicidas tienen efectos nocivos en la salud humana y al medio ambiente, tienen tiempos de vida media prolongados, por lo que pueden permanecer en el ambiente por años, además, los insectos plaga generan resistencia y aumenta la dificultad para controlarlos. Dentro del control biológico de plagas, es común el uso de Hongos entomopatógenos, principalmente los géneros Metarhizium y Beauveria, estos se caracterizan por infectar a insectos. Los conidios se adhieren a la cutícula de los insectos y los penetran, finalmente producen toxinas que les causan la muerte. Por otra parte, la mayoría de los organismos eucariotas multicelulares poseen microbiomas, ya sea en el interior o exterior de ellos, estableciendo un tipo de mutualismo, esto quiere decir que se asocian para tener beneficios mutuos, que van desde la producción e intercambio de algún metabolito, hasta proveer protección contra cualquier agente nocivo que lo haga perder su homeostasis. En el campo del control de plagas, esto resulta importante porque el microbioma asociado a algunos insectos plaga puede estar implicado en la generación de resistencia a plaguicidas, pues por un lado pueden generar enzimas para metabolizar los insecticidas químicos y, por otra parte, pueden proteger al insecto de infecciones por entomopatógenos mediante la competencia por sitios de unión, la generación de agentes antimicrobianos o por medio de la estimulación del sistema inmune del insecto. El papel del microbioma en la resistencia o susceptibilidad de insectos a hongos entomopatógenos no se ha estudiado a profundidad; considerando el papel tan importante de las asociaciones mutualistas entre eucariontes multicelulares y su microbioma, resulta relevante identificar qué tipo de microorganismos están asociados con insectos plaga, para lo cual, en este trabajo se planteó proponer un protocolo que permita la extracción de material genético del microbioma asociado a la cutícula del insecto Xyleborus affinis Eichhoff (Coleoptera: Curculionidae), para analizar la influencia de la composición de este microbioma sobre la resistencia o susceptibilidad del insecto, ya sea de campo o de laboratorio, a la infección por hongos entomopatógenos. Para poder llevar a cabo el proyecto, se realizaron bioensayos, infectando escarabajos hembras de X. affinis con Beauveria bassiana (Bals.- Criv.) Vuill. (Hypocreales: Clavicipitaceae), se encontró que los escarabajos de campo a una concentración de 1×108 con/mL presentaban un porcentaje de mortalidad de 64.18 %, este porcentaje de mortalidad era menor que los registrados en los escarabajos de laboratorio, el cual fue de 90%,sin embargo, al tratar a los escarabajos a una concentración de 1.5×107 con/mL, no hubo una diferencia significativa entre el porcentaje de mortalidad de los escarabajos de campo y de laboratorio. Por otro lado, para poder analizar si el microbioma cuticular presente en los escarabajos tenía una influencia en la susceptibilidad ante la infección por B. bassiana, los escarabajos se separaron en tres grupos, “control”, “escarabajos vivos” y “escarabajos muertos”. Posteriormente se les realizo lavados a su cutícula con Buffer Tampón-A, los lavados obtenidos se utilizaron como muestras para la extracción de ADN y finalmente se amplifico por PCR la región V3-V4 del RNA 16S y las muestras obtenidas de la amplificación se corrieron en un gel de agarosa. Se obtuvieron bandas a 500 pb, las cuales corresponden a bacterias presentes de la superficie cuticular de X. affinis, pese a que las bandas amplificadas correspondientes a la presencia de bacterias, aún se desconoce el género y la función que tienen en el hospedero,sin embargo, estosresultados pueden ser el punto de partida para conocer la influencia que tiene el microbioma ante la defensa de su hospedero.
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