Establecimiento in vitro de cultivos de callo de Calophyllum brasiliense (Cambes) productores de agentes anti VIH-1 Público Deposited
The incidence of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1)-infected people has drastically increased over the last few decades, and has motivated the search for new drugs and drug production methods. Calophyllum brasiliense (Cambes) is a rain forest tree that produces calanolides, secondary metabolites that are active against human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase (HIV-1 RT). In this thesis, we demonstrate that plant tissue culture is a useful technique for producing these metabolites. Different concentrations and combinations of plant growth regulators (KIN, BAP, TDZ, NAA, 2,4-D, IBA and PIC) were tested in leaf and seed explants to establish callus cultures capable of producing calanolides. Woody Plant Medium was used as substrate, and all cultures were incubated in dark conditions. The highest callus induction in seed explants (100%) occurred with BAP 8.88 µM + PIC 24.84 µM, whereas the highest callus inducement for the leaf explants (80.67%) occurred with KIN 0.46 µM + - naphthaleneacetic acid (NAA) 5.37 µM. HPLC quantitative analysis revealed higher calanolide B and calanolide C production in calluses from seed explants than those developed from leaves, in amounts of 309.25 vs. 8.70 mg kg-1 DW for calanolide B; 117.70 vs. 0.0 mg kg-1 DW for calanolide C, respectively. This study is therefore an initial step to investigating the production of these compounds in tissue culture with activity against HIV-1 RT.
La incidencia del virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) ha aumentado drásticamente en las últimas décadas, lo que ha motivado la búsqueda de nuevos fármacos y métodos de producción. Calophyllum brasiliense (Cambes) es un árbol tropical que produce calanólidos, metabolitos secundarios que son activos contra la transcriptasa reversa (TR) del VIH-1. En este trabajo, se demuestra que el cultivo de tejidos vegetales es una técnica útil para la producción de estos metabolitos. Para ello, se evaluaron diferentes concentraciones y combinaciones de reguladores de crecimiento vegetal (KIN, BAP, TDZ, ANA, 2,4-D, AIB y PIC) en explantes de hojas y semillas de C. brasiliense en cultivo in vitro, para establecer cultivos de callo capaces de producir calanólidos. Se utilizó el medio de cultivo para plantas leñosas WPM y todos los cultivos se incubaron en condiciones de oscuridad. Los resultados mostraron que, la mayor inducción de callo en explantes de semillas (100%) ocurrió con BAP 8.88 μM + PIC 24.84 μM, mientras que la mayor inducción de callos para los explantes de hoja (80.67%) se obtuvo con KIN 0.46 μM + ANA 5.37 μM. Los análisis cuantitativos realizados a los extractos hexánicos de callo por medio del HPLC, reveló que hubo mayor producción de calanólido B y calanólido C en los callos provenientes de los explantes de semillas que en aquellos desarrollados a partir de los explantes de hojas, en cantidades de 309.25 vs 8.70 mg kg-1 PS para el calanólido B; 117.70 vs 0.0 mg kg-1 PS para calanólido C, respectivamente. Este trabajo es un paso inicial para la investigación de la producción por cultivo de tejidos, de estos compuestos para contrarrestar el VIH-1.
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