Estudio y caracterización de andamios poliméricos de ácido poli (láctico) y ácido poli (glicólico) modificados superficialmente por plasma para su uso como sustituo de piel Público Deposited
Dada la problemática que se presenta en los casos clínicos de pacientes con quemaduras extensas, el disponer de la cantidad suficiente de piel sana para cubrir las heridas a veces no es posible por lo que los riesgos de infección u otras complicaciones se incrementan. La aplicación científica de la disciplina de ingeniería de tejidos, apoyándose en el campo de los materiales, en particular en el de los biomateriales ha permitido el desarrollo de andamios poliméricos que sirven como base para el crecimiento de células. Por lo anterior, el presente trabajo se desarrolló con la finalidad de generar un material que permita la creación de piel humana de forma artificial. Para ello se trabajó en la modificación superficial de un andamio de ácido poli-l-láctico (PLLA) y ácido poliglicólico (PGA) mediante la técnica de plasma, depositándoles una película delgada de polipirrol dopado con yodo (PPy-I). Una vez que los andamios se modificaron superficialmente se les realizó análisis de morfología y propiedades superficiales mediante microscopia electrónica de barrido y espectroscopia de infrarrojo de reflectancia total atenuada. Los espectros de infrarrojo mostraron los puntos característicos del PLLA y del PGA reportados en la literatura e identificando la presencia de los materiales base de los andamios, así como también de los grupos funcionales típicos de PPy-I sintetizado por plasma. Las imágenes de microscopía electrónica mostraron para el andamio de PLLA una estructura firme con dimensiones alrededor de 50µm en su sección transversal cuyo tamaño es idóneo para la fijación de células. Para el andamio de ácido PGA las imágenes de microscopía electrónica mostraron la fragilidad del andamio exponiendo fibras carentes de firmeza y en estado de degradación. Los andamios modificados se sometieron a pruebas biológicas a través de cultivos de células humanas primarias de la piel como fibroblastos y queratinocitos, así como también con tenocitos primarios y la línea celular HEK-293. Previo a los cultivos de células se realizó una prueba de acidez para los andamios en presencia de medio de cultivo, midiendo el pH a las 24, 48 y 72 horas y a los 7 días. El andamio de PGA sufrió un cambio muy significativo de pH (de 7.23 se fue a 3.15) causado por la degradación del material, tornando demasiado ácido el medio de cultivo e impidiendo algún tipo de crecimiento celular. Para el andamio de PLLA se tuvo un pH de alrededor de 7.38 el cual se mantuvo constante sin afectación del medio para cultivo celular. Se obtuvieron imágenes con un microscopio óptico para apreciar los núcleos celulares en un medio control, y sobre las fibras de los andamios en medio de cultivo. Las imágenes tomadas para el andamio de PGA recubierto con PPy-I (PPy-I/PGA) mostraron que ninguno de los cuatro tipos de células se ancló a las fibras y murieron. Las imágenes obtenidas para el andamio de PLLA recubierto con PPy-I (PPy-I/PLLA) mostraron células de los cuatro tipos celulares estudiados claramente adheridas a las fibras del andamio. El complejo células/andamio para PPy-I/PLLA se mantuvieron en cultivo por 9 días, posterior a esto se realizó un lavado y se hizo un remplazo del medio de cultivo por uno infectado con el adenovirus no replicable AdCMV-GFP, y se analizaron con microscopia confocal. Las fotomicrografías mostraron poblaciones celulares sobre las fibras del andamio. Como resultado de este trabajo se concluye que el andamio PPy-I/PLLA es un excelente candidato para el crecimiento de células humanas, en particular las de la piel; dejando abierta la posibilidad de obtener un andamio ideal para su uso en la regeneración de piel lesionada.
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