Pérdida de la asimetría fosfolipídica de la membrana plasmática del espermatozoide de conejo durante la capacitación y la reacción acrosomal Público Deposited
Este estudio se realizó con la finalidad de evaluar la pérdida de la asimetría fosfolipídica de la membrana plasmática de la cabeza de espermatozoides de cola de epidídimo de conejo, durante la evolución de los procesos de capacitación y reacción acrosomal haciendo uso de la unión específica de la Anexina V (marcada con un trazador fluorescente) al fosfolípido fosfatidil-serina. Se usó Ioduro de propidio como control, no sólo para detectar la presencia de daño o muerte espermática, sino también para poder seleccionar aquellos espermatozoides que no han experimentado aún por completo la reacción acrosomal. La presencia y distribución de los sitios de unión de la Anexina V fue analizada usando citometría de flujo y microscopia confocal. Después de 6 horas de incubación en un medio capacitante los espermatozoides mostraron un ligero pero significativo incremento en el número de células teñidas positivamente con Anexina V. Los sitios de unión de la Anexina V que se produjeron en la membrana plasmática de la cabeza del espermatozoide durante la capacitación se detectaron principalmente en la región post-acrosomal. Después de la capacitación se indujo reacción acrosomal con ionóforo A23187 y con progesterona. Cuando se indujo con esta última, la localización de los sitios de unión de la Anexina V se detectaron principalmente en la región acrosomal pero con un alto número de sitios de unión en el área ecuatorial. Cuando la inducción de la reacción acrosomal se hizo con A23187 la translocación de fosfatidilserina se presentó principalmente por encima de la región acrosomal y también en la región post acrosomal. La pérdida de la asimetría fosfolipídica, característica de la membrana plasmática, que se observa inicialmente durante la capacitación y, posteriormente, durante la reacción acrosomal puede ser importante no solo para favorecer la ocurrencia de la fusión entre las membranas plasmáticas y acrosomal del espermatozoide, sino también para la fusión entre el espermatozoide y el ovocito.
This study was conducted to evaluated phosphatidylserine translocation in head plasma membrane of Percoll-gradient purified of rabbit cauda epididymal sperm during capacitation and acrosome reaction (AR), using Anexin V. Propidium iodide was used as control to reject dead or dying cells. The presence and distribution of Annexin-V binding sites were analyzed using flow cytometry and confocal microscopy. After 6 h of incubation of sperm in capacitation medium, the number of cells positively stained with Annexin-V showed a small but significant increment. The Annexin-V binding sites produced during capacitation were found mainly in the postacrosomal region of the sperm head plasma membrane. After AR induction with progesterone, the localization of phosphatidylserine was changed and the Annexin-V binding sites were found almost only in the acrosomal region but with higher number of binding sites in the equatorial area. On the contrary, after AR induction with A23187 phosphatidylserine translocation although predominant over the acrosomal region was also observed in the post-acrosomal region. Plasma membrane destabilization during capacitation and AR may be important for sperm-oocyte fusion.
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