Regulación de la expresión del ARNm que codifica para la sialiltransferasa ST3-O/N una de las enzimas que sializa a la gonadotropina coriónica placentaria humana Pubblico Deposited
La gonadotropina coriónica (hCG) es una hormona de naturaleza glicoproteica, sintetizada y secretada por trofoblastos diferenciados en sinciciotrofoblastos de la placenta. Durante los primeros meses de embarazo la hCG mantiene la producción de progesterona por el cuerpo lúteo hasta que la placenta es capaz de llevar a cabo esta función. Estructuralmente, la gonadotropina coriónica está constituida por una subunidad α y una subunidad β. En el humano, la subunidad-α consta de 92 residuos de aminoácidos y tiene dos cadenas de oligosacáridos complejos unidos a asparagina (Asn) a través de enlaces N-glicosídicos en las posiciones Asn52 y Asn78. La subunidad-β está formada por 145 residuos de aminoácidos con dos sitios de glicosilación localizados en las posiciones Asn13 y Asn30 con enlaces N-glicosídicos. Adicionalmente, esta subunidad contiene otros cuatro sitios de glicosilación unidos a serina (Ser) por medio de enlaces Oglicosídicos. Las sialiltransferasas son una familia conformada por al menos 20 enzimas altamente específicas en el reconocimiento del tipo de enlace de los oligosacáridos a los cuales les adicionan residuos de ácido siálico. La diversidad funcional de las glicoproteínas que contienen ácido siálico en sus estructuras de oligosacáridos y el hecho de que estas estructuras son expresadas de manera específica o selectiva en diversos tejidos y tipos celulares, sugiere que para algunas proteínas glicosiladas el proceso de sialización podría estar regulada por factores que modulan la síntesis y secreción de las mismas moléculas glicoprotéicas. El objetivo del trabajo fue evaluar el efecto que tiene el 8Br-AMPc sobre la expresión de la sialiltransferasa ST3-O/N y en la síntesis y secreción de la hCG en la línea celular BeWo (células de coriocarcinoma humano). El análisis de la expresión génica para la sialiltransferasa ST3-O/N y βhCG se realizó mediante la técnica de Northern blot, la cual reveló que en condiciones sin estimular la tendencia observada en la expresión de la ST3-O/N fue de un ligero incremento hacia el final del tiempo de cultivo (96 horas), mientras que para la βhCG mostró una disminución con el paso del tiempo. Cuando las células fueron estimuladas con diferentes concentraciones de 8Br-AMPC la expresión de sialiltransferasa y de la βhCG resultó ser de manera dosis-dependiente. En cuanto a la estimulación con 0.75 mM de 8Br-AMPc, la expresión máxima de la ST3-O/N se dio en las primeras 24 horas postratamiento con una tendencia a disminuir hasta el final del ensayo. Por otro lado, la expresión máxima del gen para βhCG se obtuvo a las 48 horas, observando una suave tendencia a disminuir hacia el final del cultivo. En cuanto a la secreción de la hCG la cuantificación se realizó mediante la técnica de Radioinmunoensayo de doble anticuerpo en fase líquida. Tanto en condiciones basales como en la estimulación con 0.75 mM de 8Br-AMPc, la tendencia observada en la secreción de la hCG fue de una acumulación al medio de cultivo a través del tiempo. Mientras que la estimulación con diferentes concentraciones de 8Br-AMPC la secreción de la hCG fue dosis-dependiente. Con lo anterior se concluye que el AMPc influye tanto en la expresión de los ARNm de la sialiltransferasa ST3-O/N y βhCG como en la síntesis y secreción de la hCG en esta línea celular.
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