Identificación de residuos de carbohidratos de proteínas asociadas a balsas lipídicas (rafts) de espermatozoides de cerdo Public Deposited
Los espermatozoides de mamífero son móviles después de ser eyaculados, pero no pueden fertilizar al óvulo. Esta habilidad la adquieren durante su paso por el tracto reproductivo de la hembra y se le llama capacitación espermática, en la cual la activación de una adenilciclasa dependiente de bicarbonato (HCO₃- ) y de la proteína cinasa A (PKA) permiten la fosforilación de tirosinas de un grupo de proteínas, y esto se asocia con cambios en la movilidad espermática y la capacidad de respuesta del acrosoma. La membrana plasmática se modifica durante la capacitación, en especial las balsas lipídicas (rafts), compuestas de proteínas específicas, glicoesfingolípidos, gangliósidos y colesterol en la cara exoplásmica, conectada a fosfolípidos y colesterol en la cara citoplásmica de la membrana. Las proteínas de señalización de los rafts son específicas del tipo de célula y de su estado e incluyen, proteínas receptoras y no receptoras con actividad de tirosina cinasa, proteínas G, fosfolípidos de inositol, proteínas ancladas a glicosilfosfatidilinositol (GPI), óxido nítrico sintasa y otras. El objetivo de este trabajo fue Identificar residuos de carbohidratos de proteínas asociadas a los rafts de espermatozoides de cerdo frescos y capacitados. Se analizaron 7 muestras de semen de sementales sanos. Se indujo la capacitación in vitro incubando en medio TALP-Hepes 4 horas a 39˚C. Se obtuvo la fracción de rafts por ultracentrifugación en gradiente discontinuo de sacarosa, observándose una región opalescente en la interface del gradiente de 5-35% en ambas condiciones. Se realizaron electroforesis con geles de poliacrilamida al 12.5%, con 20 µg de proteína por carril. En la fracción correspondiente a las balsas lipídicas de espermatozoides frescos se observaron 16 bandas con Mr de 11 a 134 kDa y en los capacitados desde 11 hasta 141 kDa. La identificación de residuos
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