Estudio de la regulación de la producción de la invertasa por diferentes cepas de Aspergillus niger en medio liquido Público Deposited
La producción de enzimas por microorganisrnos ha tomado en los últimos dos una gran importancia debido a la facultad de algunas bacterias y hongos filamentosos de producir mimas de importancia industrial. La enzima invertasa ha sido estudiada principalmente en levaduras y en algunas especies de hongos filamentosos ( AspergiZlus nialarlmts y Aspergillus nzger) como un modelo para el conocimiento del mecanismo de producción de enzimas. Antier y col. (1993) aislaron dos clases de mutantes a partir de la cepa silvestre C28B25 de ,Bspergillus nzger, que demostraron menor grado de: represión de la producción de pectinasas por la presencia de glucosa, sacarosa o gJucomnato. Un tipo de mutantes llamada AW 99 creció y esporni6 nipido a alta actividad del agua (aw) y otra, llamada AW 96, Io hizo con bajo nivel de a,. Romero (1996) demostró que la desregulación de la síntesis de hidrolasas era general (pectinasas, amilasas, invertasas), y por lo tanto se asociaba a mutaciones probablemente pleiotrópicas de interés para la producción industrial de enzimas por tener aumentada su producción. En esta tésis se planteó como objetivo evaluai el efecto combinado del tipo de sustrato (glucosa o sacarosa) y el nivel de a, (0.96, 0.98, 0.99) sobre el perfil de producción de la enzima invertasa por las mutantes AW 96-3 y AW 99-iii , porque esta enzima solo tiene dos genes estructurales (sud y suc2) cuya regulación está cada vez mejor conocida y por ello, puede ser un sistema modelo para analizar mejor esta clase de mutaciones. La hipótesis que se planteó para este trabajo fue que estas mutantes estan desreguladas en cuanto a la represi6n por glucosa de la síntesis de invertasa y que son muy distintas entre sí en su sensibilidad ante cambios de la actividad de agua. Se corroboró que las cepas AW 96-3 y AW 99-iii son parcialmente resistentes al efecto inhibitorio de la glucosa en la síntesis de la inverta,ya, a comparación de la completa iAibici6n por glucosa @O@) observada con la cepa C28B25. Esto confirma la hipótesis de una mutación regulatoria de carácter general que reduce la represión de varios genes a la vez En todos los experimentos se observ6 que al disminuirse la actividad del agua se disrninuy6 el crecimiento de las cepas en estudio, siendo mhs sensibles a este efkcto la cepa nativa (C28B25) y la cepa mutante AW 99- iii a compevacibn de la AW 96-3. En cuanto a la actividad enzimhtica, esta tambidn fie afectada por los cambios en la actividad del agua, pero este efecto dependi6 del tipo de sustzafo utilizado. Al utilizar el medio de cultivo sacarosa y glucosa cada una por separado, como sustrato, la cepa AW 96-3 fie la que manifest6 mayor adaptabilidad a las bajas actividades de agua produciendo mayor cantidad de mimas, lo cual confirma la idea de utilizar medios selectivos con baja actividad de agua para aislar mutantes que pudieran ser de inter& industrial por resistir mejor las concentraciones elevadas de sustrato y por ello ser menos susceptibles de infectarse con organismos indeseables.
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