Introducción: La leucemia aguda linfoblástica (LAL) es el padecimiento maligno más frecuente en pediatría. RUNX1 (también llamado AML1) es uno de los genes que se alteran con mayor frecuencia en esta enfermedad. Se localiza en 21q22.12 y codifica para un factor de transcripción que regula genes que participan en la hematopoyesis. Se han descrito cuatro isoformas de la proteína RUNX1: AML1a (250 aa.), AML1b (453 aa.), AML1c (480 aa.) y AML1- ΔN (348 aa). Las isoformas de RUNX1 son factores de transcripción clave en la hematopoyesis normal y anormal, ya que promueven diferencialmente la transcripción de sus genes subordinados involucrados en este proceso. El análisis de expresión de dichas isoformas en blastos de pacientes pediátricos con LAL, ha revelado datos controvertidos Un primer estudio mostró alta expresión de las isoformas AML1b y c, en contraste, un estudio independiente determinó que la isoforma AML1a se expresa de forma preponderante en esta enfermedad. Hasta el momento, no se ha encontrado expresada una isoforma en particular que se relacione con la LAL. Objetivo: Determinar la expresión diferencial de los RNAm de las isoformas AML1a, AML1b y AML1c, y su correlación con las alteraciones del gen RUNX1 en células de médula ósea de pacientes pediátricos con LAL. Metodología: Se analizaron muestras de médula ósea de 30 pacientes pediátricos con LAL por medio de citogenética convencional con bandas GTW. Los resultados se complementaron con el método de FISH con las sondas de DNA para los genes ETV6(12p13) y RUNX1 (21q22.3). A partir de las mismas muestras criopreservadas, se analizó la expresión del RNAm de las isoformas AML1a, b y c por RT-PCR, se utilizó el gen RARα (Receptor de ácido retinóico α) como control de la reacción. Como grupo comparativo se analizaron linfocitos de sangre periférica de 10 personas sanas. Resultados y discusión: El cariotipo se obtuvo en 26 de los 30 pacientes analizados, ya que en 4 hubo falla en la obtención de cromosomas. Cuatro pacientes presentaron cariotipo normal y en 22 se observaron alteraciones como hiperdiploidías, translocaciones asociadas con LAL como la t(1;19)(q23;p13) y la t(4;11)(q21;q23), alteraciones del cromosoma 21 y rearreglos no recurrentes. El estudio de FISH mostró alteraciones en RUNX1 en 14/30 pacientes: 10 pacientes presentaron incremento en el número de copias (3 a 5 copias extra, producidas por duplicaciones o hiperdiploidías); 4 con la t(12;21)(p13;q22). El estudio de expresión de las isoformas AML1a, b y c se realizó en las 30 muestras criopreservadas. Se analizaron los productos de la RT-PCR de las isoformas esperadas (AML1a=A1, AML1b=B y AML1c=C2) y adicionalmente se detectaron 2 variantes de la isoforma AML1a (A2 y A3) y 3 de AML1c (C1, C3 y C4). En los 30 pacientes se encontró la variante C4, 26 casos presentaron las variantes de C1 y C2, y 25 pacientes mostraron la variante C3. La variante A1 se presentó en 19 pacientes y las variantes A2 y A3 se observaron en 18 pacientes. La isoforma AML1b se presentó en 9 pacientes. Con respecto a los linfocitos del grupo comparativo, todos presentaron la isoforma AML1c y sus variantes. Se caracterizaron por secuenciación automática las isoformas A, B y C, y los productos de las variantes A2, A3 y C4. Se determinó que la variante A2 carece de un fragmento de 65 pb (51pb de la región 3´ del exón 6 y 14pb del extremo 5´ del exón 7A); La variante A3 no posee el exón 6 completo; Estas dos isoformas presentan cambio en el marco de lectura. Se determinó que la variante C4 carece de un fragmento de 208pb dentro del exón 1. No fue posible secuenciar las variantes C1 y C3 debido a su bajo nivel de expresión. Todos los pacientes mostraron combinaciones en la expresión de las diversas isoformas y la B fue la única que se expresó de la forma exclusiva en los pacientes. Conclusiones: En el presente trabajo se demuestra que: a) No hay asociación entre la expresión de una o varias isoformas con la presencia de alteraciones cromosómicas específicas. b) En los blastos de pacientes con LAL no se presenta una isoforma en particular, ya que co-existen diferentes transcritos. c) La variante C4 de la isoforma AML1c, se presentó en todos los pacientes y en todos los controles. d) Se detectaron variantes no esperadas, de las cuales A3 y C4 ya han sido descritas, sin embargo, la variante A2 no se encuentra referida en la literatura. Perspectivas: Se caracterizará la presencia de las isoformas proteicas de RUNX1 para corroborar la traducción de los RNAm analizados y se estudiará la expresión de un gen subordinado de RUNX1 en los pacientes con LAL.
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