Estudio de la inducción de citocinas como mediadores de daño producido por el cadmio en células HepG2 y su relación con el estrés oxidativo Public Deposited
Cadmium has been regarded as one of the inflammation-related xenobiotics. This study was undertaken to examine the effects of low cadmium concentrations in HepG2 cells in the IL-1β, TNF-α, IL-6 and IL-8 expression, production of Hsp70 and the activation of nuclear factors AP-1 and NF-κB. Also, the participation of TNF-α and oxidative stress in AP-1 activation was evaluated. RNA was isolated from HepG2 cells after 0.5, 1, 3 or 6 h incubation with 1, 5 or 10 µM CdCl2. TNF-α and IL-1β presented a maximum response after 1 h treatment, while IL-6 and IL-8 maximum response was after 3 h treatment. The Hsp70, determined by Western blot, was constitutively produced, and it increased after 3 h Cd treatment. NF-κB activation, determined by EMSA, was not increased as a result of Cd treatment. DNA binding of AP-1 was detected and increased, with time up to 4 h with an increment of 24 times control value with 5µM CdCl2. The HepG2 cells were pretreated with anti-rhTNF-α antibody or 1 mM N-acetyl cysteine (NAC) one hour before Cd treatment. Anti-rhTNFα treatment reduced 67% AP-1 activation, while NAC 47.5%. These data indicate that, Cd induced TNF-α and IL-1β, that probably, activate AP-1 transcription factor and IL-6 and IL-8 were induced. Anti-rhTNF-α and NAC partially inhibited AP-1 activation. All imply that, a number of factors participate in AP-1 cadmium-induced activation. The Hsp70 is produced by the HepG2 cells after cadmium treatment, and probably has a role in the non-participation of NF-κB in the cellular response.
El cadmio se considera como uno de los xenobióticos relacionado con la inflamación. Este estudio fue realizado para examinar los efectos del cadmio en la expresión de la IL-1β, del TNF-α, la IL-6 y la IL-8 por RT-PCR, en la producción de la Hsp70 por Western-Blot y en la activación de los factores nucleares AP-1 y el NF-κB por el ensayo de EMSA o de retardo en las células HepG2. También se evaluó la participación del TNF-α y del estrés oxidativo en la activación de la AP-1. Las células HepG2 se expusierón a 1, 5 ó 10 µM de CdCl2 durante 0.5, 1, 3 o 6 h de incubación y los ARN fueron aislados. El TNF-α y la IL-1β presentaron una respuesta máxima en la primera hora de tratamiento, mientras que la IL-6 y la IL-8 fue a las 3 h. La producción de la Hsp70 se incrementó en las células HepG2 después de 3 h de tratamiento con CdCl2. La activación del NF-κB no se detectó, mientras que la AP-1 se incrementó 24 veces más con 5 µM de CdCl2. Las células HepG2 se pre-trataron con un anticuerpo anti-rhTNF-α o con 1 mM de la NAC durante una hora antes del tratamiento con CdCl2. El anti-rhTNF-α disminuyó la activación de la AP-1 en un 67%, mientras que la NAC en un 47.5 %. Estos resultados indican que el cadmio induce al TNF-α y la IL-1β y que probablemente la activación del factor nuclear AP-1 participe en la inducción de la IL-6 y la IL-8. Todo esto parece indicar que hay varios factores implicados en la activación de la AP-1 inducido por el cadmio y que la producción de la Hsp70 regule de manera negativa al NF-κB como respuesta celular al tratamiento con CdCl2.
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