Efecto de los niveles de oxígeno (O2) en la expresión del ARNm de los componentes angiogénicos y antiangiogénicos del Factor de Crecimiento del Endotelio Vascular (VEGF) en cultivo de células de la granulosa de folículos de bovinos Public Deposited
Las células de la granulosa se han tenido que adaptar para llevar a cabo sus funciones metabólicas en condiciones de menor concentración de oxígeno, para esto produce moléculas indispensables para su metabolismo. Los componentes angiogénicos del sistema VEGF, juegan un papel importante en la migración, proliferación y sobrevivencia de las células de la granulosa. El objetivo de este trabajo fue evaluar los efectos del nivel de oxígeno sobre la expresión del ARNm de VEGFxxx, VEGFxxxb y sus receptores en células de la granulosa de bovino en cultivo. Las células de la granulosa de folículos sanos de bovino fueron cultivadas con medio MacCoys 5a modificado (37ºC, 5% de CO2y 95 % de humedad). Se mantuvieron por 48 h en jarras de anaerobiosis bajo las siguientes, condiciones: tratamiento 1: 2% oxígeno, 5% CO2, balance de nitrógeno, tratamiento 2: 5% oxígeno, 5% CO2, balance de nitrógeno. Grupo control: 18-20% de oxígeno, 5% CO2. La expresión de cada gen se cuantificó por PCR tiempo real (qPCR) usando primers y sondas TaqMan diseñadas específicamente para cada uno de los genes. La expresión del ARNm de VEGF120, VEGF120b y VEGF164 fue mayor (P<0.05) en células cultivadas con 2% de oxígeno en comparación con 20% de oxígeno. Respecto a la isoforma VEGF164b no se observaron concentraciones detectables de ARNm, en ninguno de los niveles de oxígeno evaluados en el presente experimento. Los receptores de membrana, no se observó diferencia (P>0.05) en el número de copias por efecto del nivel de oxígeno en los cultivos de células de la granulosa. Sin embargo, la expresión del ARNm de los receptores solubles sVEGFR1 y sVEGFR2 mostraron un incremento lineal (P<0.05) en el número de copias con el aumento en el nivel de oxígeno (20%). Podemos concluir que un ambiente con 2% de oxígeno favorece la mayor expresión del ARNm de VEGF120, VEGF120b y VEGF164 en las células de la granulosa de bovino en cultivo y la expresión más baja de ARNm de sVEGFR1 y sVEGFR2, con lo cual seguramente se propiciar un medio autócrino que favorece los efectos proliferativos y de sobrevivencia de las células de la granulosa. Es probable que la condición de hipoxia fisiológica que viven las células de la granulosa in vivo, produzca un ambiente similar a lo que observamos en este experimento y con ello se favorezca el desarrollo folicular.
Granulosa cells have had to adapt to carry out their metabolic functions under conditions of lower oxygen concentration, for this produces molecules essential for their metabolism. The angiogenic components of the VEGF system play an important role in the migration, proliferation and cell survival of granulosa. The objective of this work was to evaluate the effects of oxygen level on the expression of VEGFxxx mRNA, VEGFxxxb and its receptors in bovine granulosa cells in culture. The granulosa cells of healthy bovine follicles were cultured with modified MacCoys 5a medium (37°C, 5% CO2 and 95% humidity). They were maintained for 48 hours in anaerobic jugs under the following conditions: treatment 1: 2% oxygen, 5% CO2, nitrogen balance, treatment 2: 5% oxygen, 5% CO2, nitrogen balance. Control group: 18-20% oxygen, 5% CO2. The expression of each gene was quantified by real time PCR (qPCR) using TaqMan primers and probes designed specifically for each of the genes. VEGF120, VEGF120b and VEGF164 mRNA expression was higher (P <0.05) in cells cultured with 2% oxygen compared to 20% oxygen. Regarding the VEGF164b isoform, no detectable mRNA concentrations were observed, at any of the oxygen levels evaluated in the present experiment. Membrane receptors, no difference (P> 0.05) was observed in the number of copies due to the effect of the level of oxygen in the granulosa cell cultures. However, mRNA expression of the sVEGFR1 and sVEGFR2 soluble receptors showed a linear increase (P <0.05) in the number of copies with the increase in oxygen level (20%). We can conclude that an environment with 2% oxygen favors the greater expression of VEGF120, VEGF120b and VEGF164 mRNA in the cells of bovine granulose in culture and the lowest expression of mRNA of sVEGFR1 and sVEGFR2, which will surely lead to an autocratic medium that favors the proliferative and survival effects of granulosa cells. It is likely that the condition of physiological hypoxia that the granulosa cells live in vivo, produces an environment similar to what we observed in this experiment and thereby follicular development isfavored.
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