Estudio químico y evaluación de la actividad antiinflamatoria de los extractos orgánicos de Senna crotalarioides Kunth Pubblico Deposited
The inflammation is a process consisting of a number of molecular, cellular and vascular phenomena defensive purposes against physical, chemical or biological attacks. Classically inflammation has been considered composed of four signs: warm, flushing, and tumor pain. According to the intensity and duration of the injury that results in inflammation, this is divided into acute, subacute and chronic. The inflammatory process occurs in many diseases, including rheumatoid arthritis and other autoimmune diseases for which therapeutic agents must be found to improve patient health. For the treatment of inflammation two types of antiinflammatory drugs, steroidal (EIAs) and drugs (NSAIDs) are primarily used. EIAs have anti-inflammatory and immunosuppressive effects, acting on early and late manifestations of inflammation in this last act accelerating the process of healing and tissue repair. NSAIDs are the drugs used most frequently because they block the synthesis of inflammatory mediators, so that they are able to suppress some of the signs and symptoms of this, but prolonged use of these produces adverse effects organism. In pursuit of these antiinflammatory agents, medicinal plants are a natural resource that must be explored. Senna crotalarioides is a shrub of upright stems that traditional medicine is used to treat different types of inflammation (Garcia et al, 2011); (Herbology, 2002). It was collected in the municipality Guiadalcazard the state of San Luis Potosi, allowed to dry in the shade and ground. Preparing extracts: The chloroform extract was obtained by heating at boiling temperature for 4 hours, allowed to cool and filtered. The solvent was removed on a rotary evaporator. Subsequently the methanol extract was obtained by following the same technique. Antiinflammatory activity: antiinflammatory activity of the extracts and fractions were evaluated in the model of mouse ear edema induced in 13-acetate 12-Otetradecanoylphorbol (TPA). In groups of 8 animals. The right ear of each mouse received topical application of 2.5 mL of TPA. Half an hour later, the treatments were administered at a dose of 2 mg / ear (indomethacin drug reference). After 6 hours the animals were sacrificed and discs 8 mm in diameter of both ears were cut and weighed. The difference in weight was taken as edema expression. Separation and Identification: The chloroform extract was separated by column chromatography packed with silica gel as stationary phase and hexane as mobile phase increasing the polarity with ethyl acetate. To identify the responsible compound chromatography analysis coupled to mass (GC/MS) was performed gases. Evaluation of mediators involved in the inflammatory process: worked with the J774A.1 macrophage cell line, which were treated at a concentration of 25 µg / ml S. crotalarioides treating both as reference drug. Two hours later they were stimulated with 5 ug / ml LPS, were allowed to incubate for 24 hours to subsequently recover the supernatant and make the determination of inflammatory mediators by ELISA, cells, separating mechanically were also obtained for the gene expression of TNF-α and IL6 by PCR. The results indicate that the chloroform extract significantly inhibited the ear edema, with values of 64.29% similar to that obtained with indomethacin (67.62%). Fractions 6, 7 and 8 separating the chloroform extract of S. crotalarioides significantly inhibit the edema, with values of 62.32, 68.67 and 68.08% respectively. Separation of fraction 8 5 fractions which were evaluated in the model of ear edema and of which only showed antiinflammatory subfraction 8.5 (50.91%) activity were obtained. The results show that active subfraction separating product fraction 8 of the chloroform extract of S. crotalarioides significantly suppressed the release to the TNF-α and IL-6 mediators. According to the analyzes to active fraction was identified one of the compounds present in the chloroform extract, which is ursolic acid, compound responsible for the antiinflammatory activity, possessing a mechanism of inhibition at the level of phospholipase A2. The chloroform extract and fraction 8 has activity in a model of acute inflammation, the results show that 8.5 subfraction obtained from the separation of the active fraction of the chloroform extract of S. crotalarioides exhibits anti-inflammatory activity in an in vitro model because suppressed the release of TNF-α and IL-6 mediators. The chromatographic analysis yields coupled to mass gases result in the presence of ursolic acid, the compound attached to the antiinflammatory activity of this plant.
La inflamación es un proceso tisular constituido por una serie de fenómenos moleculares, celulares y vasculares de finalidad defensiva frente a agresiones físicas, químicas o biológicas. Clásicamente la inflamación se ha considerado integrada por los cuatros signos: Calor, Rubor, Tumor y Dolor. De acuerdo a la intensidad y duración de la lesión que origine la inflamación, esta se divide en aguda, sub-aguda y crónica. El proceso inflamatorio se presenta en numerosos padecimientos, entre ellos la artritis reumatoide y otras enfermedades autoinmunes para las cuales es necesario encontrar agentes terapéuticos que permitan mejorar la salud del paciente. Para el tratamiento de la inflamación se usan básicamente dos tipos de medicamentos antiinflamatorios, los esteroidales (AIEs) y los no esteroidales (AINEs). Los AIEs tienen efectos antiinflamatorios e inmunosupresores, actuando sobre las manifestaciones iniciales y tardías de la inflamación en esta última actúan acelerando el proceso de cicatrización y de reparación de los tejidos. Los AINEs son los medicamentos que se usan con mayor frecuencia debido a que bloquean la síntesis de los mediadores de la inflamación, por lo que son capaces de suprimir algunos de los signos y síntomas de esta, pero el uso prolongado de estos produce efectos adversos en el organismo. En la búsqueda de estos agentes antiinflamatorios, las plantas medicinales son un recurso natural que es necesario explorar. Senna crotalarioides es un arbusto de tallos erguidos que en la medicina tradicional, se utiliza para tratar diferentes tipos de inflamación (García et al, 2011); (Herbología, 2002). Fue colectada en las Comadres Municipio de Guiadalcazard el estado de San Luis Potosí, se dejó secar a la sombra y se trituró. Preparación de los extractos: El extracto clorofórmico se obtuvo por calentamiento a temperatura de ebullición durante 4 horas, se dejó enfriar y se filtró. Se eliminó el disolvente en un rotavapor. Posteriormente se obtuvo el extracto metanólico, siguiendo la misma técnica. Actividad antiinflamatoria: Se evaluó la actividad antiinflamatoria de los extractos y fracciones en el modelo de edema auricular en ratón inducido con 13-acetato de 12- O-tetradecanoilforbol (TPA). En grupos de 8 animales. La oreja derecha de cada ratón recibió una aplicación tópica de 2.5 μL de TPA. Media hora después, se administraron los tratamientos en una dosis de 2 mg/oreja (fármaco de referencia indometacina). Después de 6 horas los animales se sacrificaron y se cortaron discos de 8 mm de diámetro de ambas orejas y se pesaron. La diferencia de peso se tomó como expresión del edema. Separación e identificación: El extracto clorofórmico se separó por cromatografía en columna empacada con sílica gel como fase estacionaria y hexano como fase móvil aumentando la polaridad con acetato de etilo. Para la identificación del compuesto responsable se realizó un análisis por cromatografía de gases acoplado a masas (CG/MS). Evaluación de mediadores involucrados en el proceso inflamatorio: se trabajó con la línea celular J774A.1 de macrófagos, los cuales fueron tratados a una concentración de 25 µg/ml de tratamiento tanto de S. crotalarioides como del fármaco de referencia. Dos horas después fueron estimulados con 5µg/ml de LPS, se dejaron incubar por 24 horas para posteriormente recuperar el sobrenadante y hacer la determinación de los mediadores inflamatorios por la técnica de ELISA, también se obtuvieron las células, despegándolas de forma mecánica para realizar la expresión génica de los TNF-α e IL-6 por PCR. Los resultados obtenidos indican que el extracto clorofórmico inhibe significativamente el edema auricular, con valores de 64.29 % similar al obtenido con indometacina (67.62 %). Las fracciones 6, 7 y 8 de la separación del extracto clorofórmico de S. crotalarioides inhiben significativamente el edema, con valores de 62.32, 68.67 y 68.08 % respectivamente. De la separación de la fracción 8 se obtuvieron 5 fracciones las cuales fueron evaluadas en el modelo de edema auricular y de las cuales solo la subfracción 8.5 mostró actividad antiinflamatoria (50.91%). Los resultados muestran que la subfracción activa producto de la separación de la fracción 8 del extracto clorofórmico de S. crotalarioides suprimió significativamente la liberación al medio de los mediadores TNF-α e IL-6. De acuerdo con los análisis realizados a la fracción activa se pudo identificar uno de los compuestos presentes en el extracto clorofórmico, el cual es ácido ursólico, compuesto responsable de la actividad antiinflamatoria, al poseer un mecanismo de inhibición a nivel de la fosfolipasa A2. El extracto clorofórmico y la fracción 8 tienen actividad en un modelo de inflamación aguda, los resultados muestran que la subfracción 8.5 obtenida de la separación de la fracción activa del extracto clorofórmico de S. crotalarioides presenta actividad antiinflamatoria en un modelo in vitro debido a que suprimió la liberación de los mediadores TNF–α e IL-6. El análisis por cromatografía de gases acoplado a masas arroja como resultado la presencia de ácido ursólico, compuesto al que se le atribuye la actividad antiinflamatoria de esta planta.
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