Caracterización de la adhesión celular entre células tumorales y endoteliales activadas in vitro Público Deposited
La metástasis es la invasión de células tumorales en órganos blanco distintos al lugar de origen, y se presenta en estadios avanzados de la progresión del cáncer. Los mecanismos por los cuales los tumores progresan a un estadio invasivo no son aún bien entendidos, se ha postulado que en etapas avanzadas, la célula tumoral puede migrar a través de la capa endotelial a la matriz extracelular donde prolifera y forma un depósito metastático. Los endotelios preactivados con citocinas como el TNF-a o la IL-1b presentan un incremento en la adhesión de leucocitos y de líneas tumorales humanas como las células U937. En este trabajo, hemos valorado si el incremento en adhesión resulta de un aumento en la capacidad adhesiva de toda la población de células endoteliales humanas derivadas de cordón umbilical (HUVEC), o si existe heterogeneidad en la capacidad adhesiva de las células pre-estimuladas con citocinas pro-inflamatorias. El análisis de la adhesión se realizó por medio de un conteo celular determinando cuantas células U937 son adheridas por cada célula endotelial. Los resultados muestran que la capacidad adhesiva es heterogénea, ya que tanto en cultivos de HUVECs control como en cultivos pre-estimulados con el TNF-a o la IL-1b, siempre hay células endoteliales que no presentan células U937 adheridas. Desconocemos las bases moleculares que expliquen esta heterogeneidad en la capacidad de adhesión detectada in vitro, pero podrían reflejar una heterogeneidad funcional in vivo. Paralelamente a los estudios orientados a analizar la heterogeneidad en la adhesión, se realizaron estudios orientados a identificar la presencia de moléculas de superficie que participaran en la adhesión intercelular entre el endotelio y las células U937 por medio de inmunocitofluorescencia indirecta. Las moléculas de adhesión analizadas en los experimentos de adhesión entre las células, fueron ICAM-1 y las integrinas b1 y b2. Los resultados mostraron un aumento de intensidad en la señal fluorescente de ICAM-1 y la integrina b1 en las adhesiones entre ambas células. La presencia de la integrina b2, solo fue detectable sobre las células U937 en estos ensayos. La última parte de la caracterización antigénica por medio de inmunocitofluorescencia, durante la adhesión entre células endoteliales y células U937, consistió en analizar el citoesqueleto de las células una vez establecido el contacto para tratar de identificar cambios en las morfologías celulares o zonas de despolimerización de las fibras que sugirieran la preparación de las células para una migración o diapédesis. La tinción para filamentos de tubulina, permitió observar la presencia de prolongaciones en las células U937 a manera de pseudópodos sobre las células endoteliales, sin embargo, estas extensiones no fueron observables cuando se analizó la tinción para los filamentos de actina. Las imágenes obtenidas con los anticuerpos son alentadoras ya que indican que es posible obtener información que evidencie la presencia de moléculas de adhesión y cambios en los filamentos del citoesqueleto en sitios de contacto entre las células U937 y las células endoteliales.
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