Participación de la acetilcolinesterasa (AChE) en la proliferación celular y tumorigenicidad de las células de cáncer de hígado Huh-7 y HepG2 Público Deposited
INTRODUCTION Acetylcholinesterase (AChE) is a protein with enzymatic activity whose function in the nervous system is hydrolyzed to acetylcholine (ACh) in choline and acetate. AChE presents functions no cholinergic, through which AChE can participate in the control of cell proliferation and apoptosis. Furthermore, ACh is a transmitter whose primary function is the neurological communication within the nervous system, however in recent years, the ACh has been view that actively involved both in proliferation as in inhibit of apoptosis processes. These two characteristics may be relevant in cancer, since it has been observed that levels of enzymatic activity of the AChE dramatically decrease and ACh concentrations rise, particularly in hepatocellular carcinoma (HCC), a very aggressive tumor with high incidence and poor prognosis in advanced stages. So the aim of this study was to see if levels of AChE activity play an important role in cell proliferation through of the regulation of ACh vía enzymatic. MATERIALS AND METHODS Huh-7 and HepG2 cells were seeded at high and low confluence in order to observe whether the levels of enzymatic activity of AChE and content were changed. Enzyme activity was assayed by the method of Ellman. AChE content was measured by Western blotting. Cell proliferation assay using the commercial kit CCK-8 was performed. The spheroid formation assay was performed to see if inhibition of AChE, through Bw248c51, had influence in both tumorigenicity of Huh- 7 and HepG2 cells. Finally the immunohistochemical assay was performed in a liver tumor surgical specimen, to observe whether the levels of AChE content matched the levels of enzyme activity. RESULTS AND CONCLUSIONS Results showed a relation in AChE expression and cell cycle progression, an effect which depended on cell confluence. Inhibition of AChE activity led to an increase in cell proliferation, which was associated with downregulation of p27 and increase of cyclin D1. The fact that Huh-7 and HepG2 cell lines provided similar results lent weight to the relationship of AChE expression with cell cycle progression in hepatoma cell lines at least. Human liver tumor samples exhibited a decrease in AChE activity as compared with normal tissue. The evidence presented herein provides additional support for the proposed tumor suppressor role of AChE, which makes it a potential therapeutic target in therapies against hepatocellular carcinoma.
INTRODUCCIÓN La acetilcolinesterasa (AChE) es una proteína con actividad enzimática cuya función en el sistema nervioso es la de hidrolizar a la acetilcolina (ACh) en acetato y colina. Presenta funciones no colinérgicas, a través de los cuales pueden participar en el control de la proliferación celular y la apoptosis. Por otro lado, la ACh es un transmisor cuya función principal es la comunicación neurológica dentro del sistema nervioso, sin embargo en los últimos años se ha observado que participa activamente en la proliferación celular e inhibe los procesos de apoptosis. Estas dos características podrían ser relevantes en el cáncer, ya que se ha observado que los niveles de actividad enzimática de la AChE disminuyen drásticamente y las concentraciones de ACh se elevan, particularmente en el carcinoma hepatocelular (HCC), un tumor muy agresivo con alta incidencia y mal pronóstico en etapas avanzada. Por lo que el objetivo de este trabajo fue observar si los niveles de la actividad de la AChE juegan un papel muy importante en la proliferación celular a través de la regulación, vía enzimática, del contenido de ACh. MATERIALES Y MÉTODOS Las células Huh-7 y HepG2 se sembraron a alta y baja confluencia con la finalidad de observar si los niveles de actividad enzimática y contenido de la AChE se modificaban. La actividad enzimática fue ensayada por medio del método de Ellman y el contenido de la AChE se midió por la técnica de western blot. Se realizó un ensayo de proliferación celular con ayuda del kit comercial CCK-8. Se realizó el ensayo de formación de esferoides para observar si la inhibición de la AChE, por medio del Bw248c51, tenía influencia sobre la tumorigenicidad tanto en células Huh-7 como HepG2. Por último se realizó un ensayo de inmunohistoquímica en una pieza quirúrgica de tumor hepático, para observar si los niveles de contenido de la AChE coincidían con los niveles de actividad enzimática. RESULTADOS Y CONCLUSIONES Los resultados mostraron una relación en la expresión de AChE y la progresión del ciclo celular, un efecto que dependió de la confluencia celular. La inhibición de la actividad AChE condujo a un aumento en la proliferación celular, que se asoció con disminución en la expresión de p27 y un incremento de ciclina D1. El hecho de que las líneas celulares Huh-7 y HepG2 proporcionaron resultados similares dio mayor certeza a la relación de la expresión de AChE con la progresión del ciclo celular en líneas de hepatoma. Las muestras de tumores hepáticos humanos mostraron una disminución en la actividad de AChE en comparación con el tejido normal. La evidencia presentada en este trabajo proporciona un apoyo adicional para el papel supresor tumoral propuesta para la AChE, lo que la coloca como una diana terapéutica potencial contra el HCC.
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