Influencia del líquido folicular de cerdo sobre la maduración citoplásmica del ovocito - Gallardo Ornelas, Lourdes (Universidad Autónoma Metropolitana, 1998)
La maduración del ovocito es un fenómeno complejo que involucra cambios en su núcleo y en su citoplasma. Su regulación es multifactorial y estrictamente dependiente del ambiente folicular en el cual se lleva a cabo. En el cerdo se ha reportado que el grado de maduración citoplásmica del ovocito disminuye en ovocitos madurados in vitro que con aquellos madurados in vivo. Se ha demostrado que la adición del líquido folicular de cerdo al medio de maduración mejora la maduración 'citoplhsmica del ovocito evaluada por un incremento en la formación del pronúcleo masculino en el ovocito fertilizado. Recientemente se han logrado fraccionar parcialmente el líquido folicular de cerdo, encontrando algunas fracciones que regulan tanto la maduración nuclear como citoplásmica del ovocito de la misma especie, En 6ste estudio se logró obtener una fracción del líquido folicular de cerdo que promueve la formación del PN masculino, así como también se demostró que el(1os) factor(es) de dicha fracción que promueve(n) la formación del pronúcleo masculino es(son) de naturaleza protéica. El líquido folicular se obtuvo de ovarios de cerdo mediante la punción de folículos de 2-5 mm de diámetro. Se separó la fiacción de 0-100 kDa del líquido folicular mediante ultrafiltración y, posteriormente, se obtuvieron cuatro subfracciones mediante cromatografia de intercambio iónico (Ply P2, P3 y P4). Las subfiacciones se dializaron, liofilizaron y resuspendieron en medio KRB. Para probar el efecto de las subfracciones durante la maduración in vitro de los ovocitos se formaron 6 grupos de estudio : KRB (control negativo), LFC (control positivo), Ply P2, P3 y P4 (subfiacciones). Los complejos ovocitos-cúmulus se incubaron en presencia de cada uno de los medios de maduración durante 48 h a 37 "C con 5 % de COZ y 95 % de aire. Posteriormente, los ovocitos se fertilizaron con 5 x lo5 espermatozoides/ml y se incubaron durante 18 h. Finalmente, los ovocitos se fijaron y se evaluó la maduración nuclear y la fertilización. Los resultados muestran que el porcentaje de maduración nuclear (ruptura de la vesícula germinal) obtenido en éste estudio varió del 89 al 99 %. En todos los grupos exceptuando el grupo de LFC se observó un 10-20 % de ovocitos en metafase I y un 80-90 YO de ovocitos en metafase 11. El grupo LFC sólo alcanzó un 60 % de ovocitos en metafase 11. El porcentaje de fertilización del 15 al 39 %. Los grupos P2 y P4 mostraron un incremento de la fertilización, mientras que el grupo P1 mostró una disminución cuando se comparó los grupos con el grupo LFC. El grado de formación del pronúcleos masculinos varió de 59 a 100 %. La subfracción P4 mostró un efecto similar al grupo LFC y positivo cuando se comparó con el grupo KRB, mientras que la subfracción P3 mostró un efecto inhibitorio cuando se comparó con el grupo KRB. El análisis de las proteínas de la subfracción P4 mostró un total de ocho bandas de proteínas cuyas M, oscilaron entre 28 y 80 kDa. Cuando se realizó la digestión de las proteínas de la subfracción P4 disminuyó la formación de pronúcleo masculino al compararse con la subfracción intacta (64% vs 100%). Se han descrito numerosos factores de tipo proteico que regulan la maduración del ovocito, entre ellos las gonadotrofinas y el factor de crecimiento epidérmico han sido propuestos como promotores de la maduración citoplásmica del ovocito. Es posible que algunos de los componentes de la subfiacción P4 correspondan a éstos factores o sean moléculas que actúan de manera similar a éstos para promover la maduración citoplásmica del ovocito.