Análisis clonal y detección del gen mec A y el transposón Tn554 en cepas de Staphylococcus aureus meticilino resistentes causantes de infección nosocomial en la República Mexicana Público Deposited
En el género Staphylococcus existen especies patógenas para el humano que causan una amplia variedad de enfermedades, desde infecciones cutáneas superficiales hasta enfermedades sistémicas potencialmente letales. Las nuevas técnicas de tipificación molecular, han permitido documenta la aparición de clonas de estafilococos resistentes a meticilina, capaces e producir brotes epidémicos en hospitales. Este estudio tuvo como objetivo conocer la distribución de clonas y detectar la presencia del gen mecA y el transposón Tn554 en aislamientos clínicos de Staphylococcus aureus meticilino resistentes (SAMR), responsables de infecciones nosocomiales en cuatro hospitales de la República Mexicana. Se analizaron un total de 588 cepas de SAMR por medio de la técnica de campos pulsados (PFGE) y se llevó a cabo por hibridación en membrana la detección del gen mecA y del transposón Tn554. Se asignaron los tipos del casete cromosomal estafilocócico (SSCmec) por medio de PCR y se tipificó la región polimórfica de la proteína A, (SpaA). Se realizó la determinación de la secuencia nucleotídica de siete genes esenciales, por medio de la técnica de secuencia de multilocus (MLST). Entre 1997 y 2004 se identificaron cuatro clonas de SAMR designadas como M, A, B y C; cada una de ellas presentó un perfil de resistencia característico. En las cuatro clonas fue identificada una copia del gen mecA en un fragmento de 180 y 211 Kb; excpeto en los subtipos B1 y B2 que no hibridaron con mecA. En las clonas A, B y C se detectaron dos copias del transposón Tn554 entre los fragmentos de 180-640 Kb, las cepas pertenecientes a la clona M no hibridaron con la sonda de Tn554. El SCCmec tipo IV se encontró en las clonas M y A y el casete tipo II estuvo presente en las clonas B y C, excepto en las cepas B1 y B2 que mostraron una delección de gen mecA. Y no amplificaron el producto esperado. Cinco diferentes tipos spa fueron identificados en este estudio (183: clonas A y M), 33, 204, 275: clona B) y 2: clona C. Las clonas M y A presentaron una secuencia tipo (ST30), la clona B tuvo una secuencia tipo (ST36) excepto B1 y B2 (ST30) y las cepas del patrón C mostraron una secuencia tipo (ST5). Los resultados de comparación con clonas internacionales mostraron que la clona C presentó una similitud del 85.5% con la clona pediátrica y 89.5% con la clona New York-Japón. Las clonas M, A y B tuvieron una elevada similitud con la clona EMRSA-16 (80%). Nuestro estudio enfatiza la necesidad de continuar monitoreando la diseminación de cepas epidémicas, así como el surgimiento de nuevas clonas en nuestra población. Los mecanismos de diseminación son pobremente entendidos y estudios futuros son necesarios para comprender la dinámica involucrada en la predominancia de clonas únicas de SAMR. El esclarecimiento de los factores que contribuyen a la superioridad epidémica de las clonas de SAMR pandémicas, los altos niveles de expresión de ciertos genes de virulencia y la habilidad para sobrevivir en el medio ambiente, pueden ser factores de gran importancia para el control y erradicación de los SAMR que circulan actualmente en el mundo.
The genus Staphylococcus, represents, for human beings, a pathogen that can cause an ample variety of diseases, from superficial skin infections to systemic, potentially lethal diseases. The new techniques of molecular classification allow the documentation of the appearance of staphylococcal clones resistant to methicillin, and enable us to study epidemical onsets in hospitals.This study had the aim to analyse the clone distribution and to detect the presence of gen mecA and transposon Tn554 in clinical isolates of methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA), responsable for nosocomial infections in four hospitals in Mexico City. A total of 588 strains of MRSA were analyzed with the help of the pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) technique and membrane hybridation, for the detection of gene mec A and transposon Tn554. The types of the Staphylococcal Chromosomal Cassette (SSCmec) were assigned by PCR and thepolymorphic región of protein A, (SpaA) was classified. The determination of the nucleotide sequencing of seven essenctial genes was made by the multiocus sequence technique (MLST). Between 1997 and 2004 four MRSA clones designed as M, A, B and C were identified; each one of them presented a characteristic profile of resistance. In the four clones a copy of the ggene mecA was identified in a gragment of 180 and 211 Kb; except from the subtypes B1 and B2 which did not hybridized with mecA. In clones A, B, and C two copies of the transposon Tn554 between the fragments of 180-640Kb were detected, the strains corresponding to clone M did not hybridized with the probe of Tn554. The SCCmec type IV was found in the clones M and A in the cassette type II the clones B and C, except from the strains B1 and B2 which showed a deletion of gene mecA and did not amplify the expected product. Five different types of spa were identified in this study (183: clones A and M), 33, 204, 275: clone B) and 2: clone C. The clones M and A presented a sequence of type (ST30), clone B had a sequence type (ST36) except B1 and B2 (ST30) and the strains of pattern C Showed a sequence type (ST5). The results of the comparaison with international clones showed that clone C presented a similarity of 85.5% with the pediatric clone and 89.5% with the New York-Japan clone. The clones M, A and B had an elevated similarity with the clone EMRSA-16 (80%). Our study emmphasizez the necessitty of continuing to monitor the dissemination of epidemical strains, as well as the appearance of new clones in our population. The mechanisms of the dissemination are poorly understood and future studies are necessary to understand the dynamic involved in the predominance of unique MRSA clones. The clarification of the factors which contribute to the epidemical superiority of the pandemic clones of MRSA, to the high levels of expression of certain virulence genes and to the ability to survive in the environment, cna be factors of great importance for the control and excision fo the MRSA which momentarily circulate in the world.
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