Caracterización del núcleo supraquiasmático y tracto retinohopotalamico como sistema circádico del conejo Público Deposited
Estudios cronobiológicos en conejo indican que esta especie presenta ritmos biológicos en diversas conductas como amamantamiento, excreción de orina y heces fecales, entre otros. Sin embargo, la estructura que rige la expresión de los ritmos circádicos en mamíferos, el núcleo supraquiasmático (NSQ), ha sido poco estudiada en esta especie. Por otra parte, no existen estudios del tracto retinohipotalámico (TRH), la vía de entrada directa de la información fótica, desde la retina al NSQ. Esta información es necesaria para sincronizar al NSQ al ciclo ambiental luzoscuridad. En la presente tesis se realizaron 4 experimentos, primeramente, se caracterizó el TRH tanto de conejos adultos como de neonatos y se determinó si existían diferencias ontogenéticas en sus proyecciones hacia el NSQ y otras regiones hipotalámicas. En los siguientes experimentos se estudió la expresión se la proteína Fosen las condiciones de luz-oscuridad, oscuridad constante, y la respuesta a pulsos de luz en el NSQ de sujetos adultos. En el primer experimento, se utilizaron conejos Nueva Zelanda blancos en los días postnatales 1 (P01 ;n=6), 9 (P09;n=4) y adultos (n=S). Los sujetos se perfundieron 3 días después de la aplicación intraocular unilateral de í3-toxina de cólera (í3-TC) y los cerebros se cortaron en un criostato (50µm). Las secciones se procesaron por el método de inmunocitoquímica utilizando anticuerpos contra í3-TC y el complejo ABC. Posteriormente, las secciones se analizaron bajo el microscopio óptico y cámara lucida. En los tres grupos, se observó el marcaje del trazador de la í3-TC con una densidad similar bilateral a lo largo de todo el núcleo. Sin embargo, en P09 y adultos se observa una tendencia contralateral particularmente en la porción media (en un sentido antero-posterior) del núcleo y ventral hacia el quiasma óptico. La inmunorreactividad a í3-TC, se observó en otras estructuras retinorrecipientes como la hojuela intergeniculada, el núcleo geniculado lateral dorsal y ventral, el colículo, así como áreas hipotalámicas adyacentes, siendo más evidente en los animales P09 y adultos. Estos resultados indican que el TRH está presente desde la edad P01 hasta el adulto, aunque hay un marcaje importante del TRH que podría asociarse al momento de la apertura de los párpados el cual ocurre alrededor de P09. En el segundo experimento, los animales fueron puestos en condición de luz-oscuridad, LD (12:12, encendido de la luz a las 07:00 am. ZT0). Se utilizaron conejas albinas de la cepa Nueva Zelanda, se perfundieron transcardialmente (con paraformaldehído, 4%) cada 4 horas, iniciando una hora después del encendido de la luz. En esta condición se utilizaron 6 grupos (uno para cada horario; n=4). Los cerebros se cortaron coronalmente (50 µm) y las secciones se trataron con la técnica de inmunocitoquímica. La inmunorreactividad. a Fos (ir-Fos) se observó en el microscopio de luz. En este y los siguientes experimentos se utilizaron secciones tratadas con tinción de Nissl para la delimitación citoarquitectónica del NSQ. Se observó un incremento significativo en el número de neuronas ir-Fosen ZT01 (hora geográfica [hg]-08:00 h) y ZT0S (hg-12:00 h) en comparación con los demás horarios. En el tercer experimento, los animales fueron expuestos a la condición de LO durante 7 días y posteriormente a la condición de oscuridad constante (DO) durante 3 días más. Se formaron 6 grupos (uno para cada horario; n=4). El tejido se trató por medio del protocolo establecido y se observó un aumento significativo en CT07 (hg-16:00 h) en comparación con los demás horarios. Para el cuarto experimento se formaron 4 grupos (n=4) y los animales fueron sometidos a las condiciones de LO (7 días) y DO (3 días) donde se les aplicaron pulsos de luz (850 lux/30 min) en los horarios de CT03, CT11, CT15 y CT19. Los cerebros y el tejido se trataron con el protocolo establecido y se observó un número significativamente mayor de células ir-Fos en los horarios CT15 y CT19, el cual se presentó principalmente en el área ventrolateral del NSQ con respecto a CT03 y CT11. En conclusión, se mostró que, en el NSQ del conejo, existe un ritmo diurno de Fos en LD, un ritmo circadiano en DD y que solo el área ventrolateral del núcleo es foto-inducible durante la noche subjetiva con respecto a otras áreas del mismo. El presente trabajo provee por primera vez datos acerca de la distribución de las fibras del TRH en diferentes edades del conejo, así como de la anatomía funcional del NSQ en esta especie.
Chronobiological studies in the rabbit indicates that this species presents circadian rhythms in nursing, and in urine and fecal excretions, among others. However, the suprachiasmatic nucleus (SCN) the main circadian clock in mammals had been little studied in the rabbit. On the other hand, there is no studies of the retinohypothalamic tract (RHT) the main entrance pathway from retina to the SCN. This information is necesary to synchronize SCN to enviromental light-dark cicle. In this thesis we conducted four experiments. First, we characterized RHT in adults and neonatal rabbits to determine possible ontogenetic differences in their projections to the SCN and other hypothalamic regions. In the other experiments, we studied the expression of Fos protein in lightdark condition, constant dark and responce to a light pulse in the SCN adult subjects. In the first experiment we used New Zealand white rabbits at postnatal day (PO) 1 (n=6), PD9 (n=4) and adults (n=5). Subjets were perfused 3 days latter of one unilateral intraocular injection of cholera toxin B subunit (BCT) and brains were sectioned with a cryostat (50 µm). Tissue was processed by immunocytochemistry with antibodies against B-CT and ABC methods and was analyzed with an optical microscope and camera lucida. In the tree groups we observed B-CT-immunorreactivity (-IR) with a similar bilateral distribution throughtout the nucleus. However at PD9 and in adults the density of fibers have a contralateral tendency in the ventral region of the nucleus, at medium level (in a rostro-caudal plane). B-CT-IR was observed in other retinorrecipient structures as in lateral geniculate nucJeus, intergeniculate leafled and colliculus, as well as several hypothalamic areas and nuclei. In conclusion RHT is present since PD1; at PD9 around the time when the eyelides are open, there is an important increase of B-CT-IR in the SCN as well as in the other retinorrecipient areas. In the second experiment subjects were expossed to a light-dark condition (LO; 12:12, lights on at 07:00 am, ZT0). Rabbit were perfused transcardially with paraformaldehide (4%) every 4 hours, starting one hour after lights on. We used 6 groups (n=4 each group), and brains were cut (50 µm) and processed for Fos-lR. To help in the cytoarchitectonic delimitation of the SCN in this and the following experiments alternate sections were Nissl stained. There was a significant increase in the number of Fos-lR neurons at ZT01 (08:00 h. geographical hour) and ZT05 (12:00 h. geographical hour). In the third experiment subjects were expossed 7 days to LO condition an then to constan darkness (DO) for 3 days. Tissue was processed for Fos-lR as mentioned above and we found a significant increase of Fos-lR, only at CT07 (16:00 h. geographical hour). In the fourth experiment we exposed subjects to DD condition for 3 days and then to a light pulse (850 lux/30 min.) at CT03, CT11, CT15 and CT19 (n=4 each group). In the last two groups there was a significant increase of Fos-lR neurons in the ventrolateral area of the nucleus against CT03 and CT11 groups. In conclussion, we found a daily rhythm of Fos in LD, a circadian rhythm in DD and a Fos photoinduction during the subjective night, only in the ventrolateral region of the nucleus. This thesis report by the firs time about retinohypothalamic tract in the rabbit and also about functional morphology of the SCN in this species.
Relaciones
| En Conjunto Administrativo: |
|---|
Descripciones
| Nombre del atributo | Valores |
|---|---|
| Creador | |
| Colaboradores | |
| Tema | |
| Editor | |
| Idioma | |
| Palabra Clave | |
| Año de publicación |
|
| Tipo de Recurso | |
| Derechos | |
| División académica | |
| Línea académica | |
| Licencia |
