Análisis de la administración de células progenitoras retinales derivadas de la glía de Müller bajo un tratamiento con GABA y glutamato, en un modelo de daño retinal Público Deposited
Müller Glia cells acquire neurogenic potential in fish and avían as a result of neurotoxic injury in vivo or a high dose of N-methyl-O-aspartate (NMOA) in culture . However, in mammals Müller cells are not able to regenerate retinal cells lost to pathology in spite of their proven capacity to dedifferentate, proliferate and differentiate to retinal neurons. Recent approaches demonstrated that GABA induces the expression of early neuronal markers in postnatal retinal progenitor cell derived from Müller glia and that glutamate increases the number of proliferating cells . In the present study we corroborated that retinal neurospheres, isolated from Müller glia primary cultures from transgenic rat expressing green fluorescent protein (GFP+), have multipotent stem cell characteristics which enable their use for stem cell transplantation in arder to replenish the degenerating retina with new neurons. In arder to analyze their regenerative capacity and the effect of GABA and glutamate treatment on the survival or transplanted GFP+ Müller cell-derived progenitors we established an injury rat retinal model through intravitreal injection of 250 mM NMDA. We demonstrated by inmunofluorescence that NMDA triggered changes on retinal layers, horizontal and photoreceptor cell loss, apoptosis, gliosis (increase of GFAP) and expression of nestin (neuronal stem cell marker). We performed intravitreal transplant of GFP+ Müller cell derived progenitors treated with GABA and glutamate. Microscopy analysis revealed the presence of cells GFP+ in the retina 2 and 6 days after transplant. Pre-treatment of these cells with GABA induced a statistically significant increase in the number of detected cells compared with cell with glutamate and control medium. These cells expressed Ki67 (marker for proliferation) and Beta-111 Tubul i na (early neuronal marker) suggesting that the induction of GABA receptor signaling could represent a strategy to enhance neuronal specification through the same pathway characterized in hippocampal progenitors and developing neurons.
Las cé lulas gliales de Müller adquieren un potencial neurogénico en pez y pollo como resultado de un daño neurotóxico in vivo o en consecuencia a una dosis alta de N-metil-O- aspartato (NMDA) en cultivo . Sin embargo, la glía de Müller en mamíferos no es capaz de regenerar la pérdida de las células retinales a pesar de que se ha demostrado que posee la capacidad de desdiferenciarse, proliferar y diferenciarse hacia diferentes linajes neuronales de la retina. Hallazgos recientes han demostrado que el neurotransmisor GABA media la inducción de la expresión de marcadores neuronales tempranos en células progenitoras de retina postnatal de rata derivadas a partir de la glía de Müller y que el glutamato incrementa su proliferación. En este estudio, corroboramos que neuroesferas retinales, aisladas de cultivos de glía de Müller de ratas transgénicas que expresan constitutivamente la proteína verde fluorescente (GFP+), poseen características propias de células progenitoras multipotentes que pudieran ser utilizadas en trasplantes con el fin de reemplazar a la retina dañada con nuevas neuronas. Para poder analizar la posible capacidad regenerativa y el efecto de los tratamientos con glutamato y GABA sobre la sobrevivencia de estas células en el trasplante, establecimos un modelo de daño retina! a través de la inyección intravítrea con NMDA (250 mM). Demostramos por inmunofluorescencia que se desencadenan cambios en las capas retinales, pérdida de células horizontales y fotorreceptores, gliosis (aumento de GFAP) y expresión de Nestina (marcador de células troncales neuronales). Mediante inyección intravítreal realizamos el trasplante de las neuroesferas disociadas GFP+ tratadas con glutamato o GABA. Los análisis de microscopía revelaron la presencia de células GFP+ en la retina 2 y 6 días posteriores al trasplante. A su vez, el pre-tratamiento con GABA induce un incremento moderado pero significativo en el número de cé lulas detectables en comparación con las células cultivadas con glutamato y medio control. También observamos que estas células expresaron Ki 67 (marcador de proliferación) y Beta-111 Tubulina (marcador neuronal temprano), sugiriendo que la activación de los receptores Gabaérgicos podría representar una señal de especificación neuronal similar a la vía de señalización en progenitores de hipocampo.
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2026-03-30 | Público |
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