%0 Tesiuam %T Mecanismos de desplegamiento y replegamiento térmicos de la enzima dimerica triosafosfato isomerasa de levadura %A Benítez Cardoza, Claudia Guadalupe %D 2001-07 %8 2020-04-24 %E Rojo Domínguez, Arturo; Hernández Arana, Andrés; Solís Mendiola, Dolores Silvia; Gómez Puyou, Armando; Fernández Velasco, Daniel Alejandro; Moreno Carcamo, Abel %I Universidad Autónoma Metropolitana %R https://doi.org/10.24275/uami.np193924b %X En el presente trabajo se estudió el desplegamiento térmico de la triosafosfato isomerasa (TIM) de levadura empleando para ello calorimetría diferencial de barrido y métodos espectroscópicos tales como dicroísmo circular (DC) y fluorescencia. Primeramente se buscaron condiciones de reversibilidad en las transiciones de desplegamiento térmico seguidas por DC, siendo éstas: pH 8.5, concentraciones de proteína menores a 0.150 mg mL-1 y velocidades de barrido mayores a 1 oC min-1 . A pesar de que los barridos de desplegamiento térmico fueron reversibles, los ciclos de desplegamientoreplegamiento presentaron una marcada histéresis. Por otro lado, se realizaron estudios cinéticos utilizando las técnicas de DC y fluorescencia. Con ellos se probó que el desplegamiento consiste, inicialmente, de una reacción de primer orden, que conlleva a la formación de un estado térmicamente desplegado, U. A juzgar por la señal de DC, U contiene estructura secundaria residual pero carece de la mayoría de las interacciones terciarias presentes en la proteína nativa. U puede formar un estado irreversiblemente desplegado (probablemente por agregación) si permanece expuesto durante períodos prolongados a temperaturas altas. En contraste, si se enfría rápidamente el estado U es capaz de replegarse hasta la forma nativa a través de una cinética de segundo orden. A partir de los resultados obtenidos en las cinéticas de replegamiento seguidas por DC se observó que la unión de los monómeros del estado U para formar la TIM nativa está asociada a la recuperación de estructura secundaria Asimismo, se determinaron los parámetros de activación de los procesos de desplegamiento y replegamiento. El Hu de activación determinado fue alto (480 kJ mol-1 ) comparado con lo reportado para varias proteínas monoméricas. El valor de Cp ‡ u es prácticamente insignificante (2.1 ± 5.9 kJ mol-1 K -1 ). Por el contrario, el replegamiento muestra un valor muy grande y negativo de Cp ‡ r (-31 ± 7 kJ mol-1 K -1 ), lo que concuerda satisfactoriamente con lo publicado para varias proteínas monoméricas. La dependencia de las constantes cinéticas de desplegamiento y replegamiento con la temperatura podría ser una probable explicación de la histéresis observada en los barridos térmicos. %G spa %[ 2023-12-22 %9 info:eu-repo/semantics/doctoralThesis %~ UAM %W UAM