Estrategias para el control microbiano durante el desarrollo embrionario y larvario de la cabrilla arenera, Paralabrax maculatofasciatus (Steindachner, 1868) Público Deposited

La cabrilla arenera Paralabrax maculatofasciatus es un pez marino que en Noroeste de México ha servido como modelo de estudio para el desarrollo de técnicas de cultivo. Al igual que en muchas otras especies de peces marinos, una de las principales limitaciones para la producción masiva de la cabrilla arenera es la elevada mortalidad durante los primeros estadios de vida. Aunque se desconocen las causas de dichas muertes, se ha sugerido que pueden ser provocadas por factores como la fragilidad de las larvas al manejo, la inadecuada calidad nutricional del alimento y la introducción de bacterias patógenas a los sistemas de producción a través del alimento vivo y agua. Por ello, en el presente trabajo, se evaluó el componente microbiano como causa de mortalidad larvaria y se desarrollaron procedimientos para su control. Se analizó el establecimiento de la microbiota durante el desarrollo larvario, discriminando entre la microbiota interna interna y externa y se analizaron todas las posibles fuentes de esta microbiota. Durante la etapa larvaria se aislaron las bacterias: Vibrio alginolyticus, V. campbelli, V. carchariae, V. mediterranei, V. metschnikovii, V. parahaemolyticus, V. proteolyticus, Aeromonas allosacharophila, A. hydrophila, A. media y A. veronii como parte de la microbiota de las larvas de cabrilla o bien de los alimentos proporcionados. Se determinó que la adquisición de la microbiota en las larvas de cabrilla coincide con la primera alimentación y que los rotíferos y Artemia actuan como vectores de un gran numero de bacterias potencialmente patógenas. En el presente trabajo se desarrolló un modelo de infeccion con organismos libres de bacterias para evaluar el papel de las bacterias aisladas. En esas condiciones, se determinó que algunas de las bacterias que son consideradas patógenas en larvas de peces no causan efectos negativos en los cultivos de rotíferos y que además pueden soportar su crecimiento cuando son utilizadas como unica fuente de alimento. Se observó que Aeromonas media, Aeromonas sp. y Vibrio carchariae (sinon harveyi) son patógenas para las larvas de cabrilla e incrementan significativamente la mortalidad. Ninguna de las cepas probadas produce efectos benéficos en la supervivencia larval. Adicionalmente se observó que la cepa C303 es capaz de provocar mortalidad del 100% en menos de 8 horas cuando se inocula intraperitonealmente en juveniles. Por lo anterior, se desarrollaron procedimientos para la eliminación de bacterias. El primero con el propósito de limitar la transmision vertical de patógenos oportunistas mediante la desinfección de embriones. Los mejores resultados se obtuvieron con H2O2 al 3% en baño durante 7 min. Con la desinfeccion de huevos se logró un incremento significativo en la supervivencia al momento de la eclosión, lo cual indica un efecto negativo de las bacterias de la superficie del corion. Para prevenir la contaminación por vía trófica, se desarrollaron procedimientos para eliminar la microbiota de rotíferos. Se encontró que utilizando la mezcla de antibióticos Trimetoprim-Sulfametoxasol (Bactrim® Roche) en huevos amícticos, se produce una progenie libre de bacterias. Adicionalmente, se determinó que algunas microalgas del género Tetraselmis, producen un efecto antibacteriano contra diversas cepas de Vibrio, incluyendo las aisladas en el presente estudio. Por lo que se evaluó el uso de Tetraselmis spp. como una estrategia de control biológico durante la producción de rotíferos. Se encontró que Tetraselmis produce una reduccion significativa de la carga de vibrios en la microbiota de rotíferos. Por último, se analizó el uso de bacterias como agentes de control en el cultivo de larvas. Para ello se aislaron bacterias de distintas fuentes marinas y se analizó su potencial probiótico. Las bacterias seleccionadas tienen la capacidad de inhibir a Vibrio, sin embargo al probarlas con las larvas no se observaron mejoras significativas en la supervivencia.

The spotted sand bass have been used in México as a model for the study and development of aquaculture procedures. As occurs in most marine fish, a factor that affects the mass production is the high mortality during the early development. The specific causes of this mortality remains unknown, however, has been suggested that are produced by the low tolerance at manipulation, the inadequate nutritional quality of the given feeds and the introduction of pathogenic bacteria into the cultures through the foods and water. In this thesis, it was analyzed the microbial component as a cause of larval mortality and were developed procedures for their control. The establishment of the microbiota was analyzed during the larval development of the spotted sand bass, discriminating between the internal and external bacteria and analyzing their potential origins. Vibrio alginolyticus, V. campbelli, V. carchariae (sinon. harveyi), V. mediterranei, V. metschnikovii, V. parahaemolyticus, V. proteolyticus, Aeromonas allosacharophila, A. hydrophila, A. media and A. veronii were isolated as microbiota of spotted sand bass larvae and from the live feeds provided during this stage. It was found that the acquisition of the microbiota in the spotted sand bass larvae occurs during the first feeding, also, that the rotifers and Artemia are the vectors of potentially pathogenic bacteria. In order to evaluate the role of the isolated bacteria, challenge test was implemented under bacteria free conditions. Under these conditions we found that some bacteria, commonly considered pathogenic for fish larvae, do not affect the rotifer cultures and can promote their growth when are used as a sole source of food. By contrast, Aeromonas media, Aeromonas sp and Vibrio carchariae (sinon. harveyi) are pathogenic for spotted sand bass larvae, increasing significantly the mortality. None of the tested bacteria improve the larval survival. Also, the strain C303 (V. carchariae) produces 100% mortality in less than 8 hours, when was inoculated by intraperitoneal injection in juvenile fish. In consequence, procedures were developed for their control. In first instance through the disinfection of embryos in order to reduce the vertical transmission of opportunistic pathogens. The best results were obtained with 7 min in H2O2 at 3%. With the disinfection of eggs we obtained an increase in the survival at hatching, which indicate a negative effect of the bacteria from the corion surface. The decontamination of rotifers was achieved in order to prevent the contamination by the trophic chain. The use of Trimetoprim Sulfametoxasole (Bactrim® Roche) in the amictic eggs, produces a bacteria free progenie. Also, we found that some strains of Tetraselmis have an antibacterial effect on several strains of Vibrio, including the strains isolated in this study. In consequence we evaluate the use of Tetraselmis spp as a biologic control during the rotifer production. We found a significant reduction in the number of vibrios of the rotifer microbiota during the cohabitation with Tetraselmis spp. Finally, the use of bacteria as a method of biologic control for the culture of larvae was analyzed. Some bacteria were isolated from diferent sources, and they were selected according to their probiotic potential. The selected bacteria have anti-Vibrio properties, however, when were evaluated during the larvae growth, no improvements on survival were observed.

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