Detección de mutación somática Pig-a en eritrocitos de sangre periférica de ratas desnutridas - Pacheco Martínez, Mercedes Monserrat (Universidad Autónoma Metropolitana, 2012)
La asimilación deficiente de alimentos por el organismo conduce a un estado patológico con distintos grados y manifestaciones clínicas, conocido como Desnutrición (Gómez, 1946). Los estudios en el área de la toxicología genética han generado un número importante de procedimientos in vivo e in vitro, los cuales han sido diseñados para monitorear los efectos que diversos agentes físicos y químicos tienen sobre la integridad genética de las células, así como los posibles riesgos que estos representan para los organismos (Abramsson y cols., 2000; Krishna y Hayashi, 2000). Entre estos procedimientos se incluyen: la medición de proteínas asociadas al ADN, localización de mutaciones puntuales o eventos genéticos que afectan a un gen específico (Abramsson y cols., 2000). El gen glucosilfosfatidilinositol de clase A (Pig-a) se localiza en el brazo corto del cromosoma X (Takahaski y cols., 1993; Rosee, 1997; Tomita, 1999; Phonethepswath y cols., 2008). Este gen codifica para la subunidad catalítica que participa en la primera etapa de la síntesis de de glucosilfosfatidilinositol (GPI) (Takahaski y cols., 1993; Hernández y cols., 2008). GPI es esencial para el anclaje de una gran variedad de proteínas de la membrana citoplasmática (Hernández y cols., 2008). En los últimos años ha surgido un nuevo ensayo in vivo de detección de mutación somática basado en el gen Pig-a (Pig-a en los roedores, PIG-A en los seres humanos). El ensayo consiste en detectar mutaciones somáticas por medio de citometría de flujo. En una célula normal un número de proteínas sintetizadas en el retículo endoplásmico llegan a unirse covalentemente a la molécula de GPI. Estas proteínas dependientes de GPI aparecen en la superficie celular, y pueden ser detectadas por los anticuerpos apropiados conjugados con fluorocromos (Karadimitris y Luzzatto, 2001). En este estudio se utilizó el ensayo Pig-a como una herramienta para analizar el daño génico en un modelo de desnutrición grave expuesto a un potente mutágeno. El ensayo se basó en realizar un marcaje diferencial de reticulocitos y eritrocitos usando un anticuerpo conjugado con un fluorocromo (antiCD59-PE). Se tomó como indicador de daño al material genético de las células, el incremento en las frecuencias de mutantes Pig-a, que fueron analizadas en un millón de células, procedentes de sangre periférica de ratas cepa Wistar expuestas a un mutágeno durante 8 semanas. Los resultados muestran que la desnutrición grave por sí misma tiene un efecto dañino sobre la integridad del material genético. Las frecuencias de mutantes se incrementaron en el tiempo. El ensayo Pig-a es de reciente introducción como método génico de evaluación genotóxica. De acuerdo a los resultados obtenidos, es necesario continuar el estudio del efecto de la desnutrición sobre el material genético, apoyándose en estudios complementarios.; The deficient assimilation of nutrients by the body leads to a pathological condition with varying degrees and manifestations, known as malnutrition (Gomez, 1946). Studies in the area of genetic toxicology have generated a large number of procedures in vivo and in vitro, which are designed to monitor the effects of various physical and chemical agents have on the genetic integrity of cells and the possible risks they pose for the organisms (Abramsson et al., 2000, Krishna and Hayashi, 2000). These procedures include measurement of DNA-associated proteins, location of mutations or genetic events affecting a specific gene (Abramsson et al., 2000). The gene glycosylphosphatidylinositol of class A (Pig-a) is located on the short arm of chromosome X (Takahaski et al., 1993; Rosee, 1997; Tomita, 1999; Phonethepswath et al., 2008). This gene encodes the catalytic subunit involved in the first stage of the synthesis of glycosylphosphatidylinositol (GPI) (Takahaski et al., 1993, Hernandez et al., 2008). GPI anchor is essential for a variety of cytoplasmic membrane proteins (Hernandez et al., 2008). In recent years a new in vivo assay for detection of somatic mutation in the gene based Pig-a (Pig-a in rodents, PIG-A in humans). The assay involves the detection of somatic mutations by flow cytometry. In a normal cell a number of proteins synthesized in the endoplasmic reticulum become covalently bound to the GPI molecule. These proteins appear GPI dependent on the cell surface and can be detected by appropriate antibodies conjugated with fluorochromes (Karadimitris and Luzzatto, 2001). In this study we used the Pig-a test as a tool for analyzing gene damage in a model of severe malnutrition exposed to a potent mutagen. The assay was based on post a differential staining of reticulocytes and erythrocytes using a fluorochrome-conjugated antibody (antiCD59-PE). Was taken as an indicator of damage to the genetic material of cells, increases in mutant frequencies Pig-a, which were analyzed in a million cells from peripheral blood of rats Wistar exposed to a mutagen for 8 weeks. The results show that severe malnutrition alone has a harmful effect on the integrity of genetic material. The frequencies of mutants increased over time. The trial Pig-a is newly introduced as a method of evaluating genotoxic gene. According to the results obtained, it is necessary to continue the study of the effect of malnutrition on the genetic material, based on studies.