Efecto de los inhibidores de H+-ATPasas durante la maduración, capacitación y reacción acrosomal del espermatozoide de conejo Público Deposited
Mammalian spermatozoa maintain precisely regulated ionic gradients that must be modified during capacitation and the acrosomal reaction. In other cell types, ionic gradients are mainly regulated by the presence in plasma membranes of three metabolically different types of ATPases. The modifications induced during in vitro capacitation of rabbit spermatozoa by the specific inhibition of V-type H+-ATPases with bafilomycin Al were studied. We used chlortetracycline binding to rabbit spermatozoa to monitor capacitation, and the coomassie brilliant blue method to identify acrosome-reacted sperm cells. There was a significant difference between the percentage of epididymal (66&7%) and of ejaculated (43&11%) spermatozoa capacitated in vitro, after a 6 h incubation period in the presence of Ca* without ATPase inhibitor. Presence of bafilomycin significantly reduced these numbers (25*11% and 16&8%, epididymal and ejaculated spermatozoa, respectively) and eliminated the difference. Ejaculated spermatozoa capacitated in the absence of bafilomycin showed a linear increase in the percentage of acrosomal reactions induced by addition of A23187 (12rt5; 23i6, 31i6; after 1530 and 45 min). Presence of 0.2 pmol I" bafilomycin during the capacitation incubation induced a significant decrease in the acrosome reaction percentages (4&2,8&3, 14f4; after 1530 and 45 min). Addition of bafilomycin after the capacitating period had no effect upon the induction of the acrosomal reaction by A23187. Capacitated spermatozoa in absence of bafilomycin showed an increase in intracellular pH (pH¡) about 0.23 units, addition of bafilomycin during the capacitating period abolished the increased pH¡, but when V-ATPase inhibitor was added after the capacitating period had not effect These results indicate that vacuolar H+-ATPases play an important role during rabbit sperm capacitation; however, once the sperm has been capacitated V-Type H'-ATPases do not have a significant participation during the acrosomal reaction.
Los espermatozoides de mamíferos mantienen los gradientes idnicos regulados con precisidn durante los procesos de capacitacidn y reaccidn acrosomal. En otros tipos de dlulas, dichos gradientes se modulan principalmente por medio de tres tipos de ATPasas, que presentan diferencias metabdlicas y que se localizan en la membrana plasmdtica. En el presente trabajo estudiamos las modificaciones en la capacitacidn in vitro de los espermatozoides de conejo, inducidas por la inhibicidn especifica de las H+-ATPasas tipo V con el antibidtico macrdlido bafilomicina Al. Usamos el metodo de clorotetraciclina para monitorear la capacitacidn, y el metodo de tincidn con azul de Coomassie para identificar los espermatozoides con reaccidn acrosomal. Hubo diferencias significativas en el porcentaje de espermatozoides capacitados in vitro que provenían del epidídimo (6627) y eyaculados (43+11), despues de su incubacidn durante 6 horas en presencia de Ca2' y en ausencia del inhibidor de ATPasas. La presencia de bafilomicina AI redujo significativamente esos valores (25211 y1628 %, en espermatozoides del epidídimo y eyaculados, respectivamente) y elimin6 la diferencia anteriormente observada. En los espermatozoides eyaculados capacitados en ausencia de bafilomicina, el porcentaje de reaccidn acrosomal, inducida con el iondforo de calcio A23187, fue lineal (1225, 2356, 3125, a los 15, 30 y 45 minutos). La presencia de bafilomicina Al (0.2 pmoles.1") durante la capacitacidn provocd una disminucidn significativa en los porcentajes de reaccidn acrosomal (422, 823, 1424, a los 15, 30 y 45 minutos.). La adicidn de bafilomicina Al despues del periodo de capacitacidn no tuvo efecto en la reacci6n acrosomal inducida con A23187. En los espermatozoides capacitados en ausencia de bafilomicina Al se observd un incremento en el pH intracelular (pH¡) de 0.23 unidades comparado con el pH¡ de los no capacitados, la adicidn de bafilomicina Al durante el periodo de capacitacidn evitd dicho incremento, no se present6 el efecto cuando el inhibidor se adiciond al final de la capacitacidn. Los resultados del presente trabajo indican que las H'ATPasas tipo V juegan un papel importante durante la capacitacidn de los espermatozoides de conejo, una vez que los espermatozoides se han capacitado, este tipo de ATPasas no tienen una participaci6n significativa en la inducci6n de la reaccidn acrosomal.
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