Producción y caracterización de un extracto proteolítico termoestable Público Deposited
La producción de enzimas es de gran interés debido a la importancia industrial que tienen. En la actualidad se ha incrementado el interés en la producción de enzimas que puedan tener características de termoestabilidad, las cuales puedan ser empleadas en procesos donde las temperaturas son superiores a 45°C. El objetivo del presente trabajo de investigación fue seleccionar una cepa termotolerante productora de proteasas termoestables, además de la caracterización del extracto proteolítico producido. A partir de 72 cepas fúngicas se inició una preselección basada en el crecimiento a 45°C, tras la cual fueron seleccionadas 29 cepas. Basada en la producción de proteasas en placas de agar leche descremada se inició una segunda etapa de preselección, en la cual el criterio de selección fue el Índice de Potencia (I. P.). En esta etapa se seleccionaron las tres cepas fúngicas que tuvieron el mayor I. P. (2.2 aB, 2.7 aB y 36 aIV) para analizar su capacidad de producción de proteasas termoestables. A partir de las cepas fúngicas preseleccionadas se procedió a obtener los extractos proteolíticos mediante cultivos en medio sólido. Debido a la baja actividad proteolítica que presentó se descartó la cepa 2.7 aB. Posteriormente, se evaluaron las condiciones óptimas de reacción enzimática para los extractos proteolíticos producidos por las cepas 36 aIV y 2.2 aB, obteniéndose un pH de 7 y 9 respectivamente, mientras que ambos extractos tuvieron un tiempo de reacción de 3 minutos y 50°C fue su temperatura óptima para ambos extractos. Una vez optimizadas las condiciones de reacción enzimática se evaluó la estabilidad térmica a diferentes temperaturas (30-80°C), y mediante una cinética de primer orden se determinaron los tiempos de vida media de los extractos proteolíticos. Para el extracto producido por la cepa 2.2 aB se obtuvieron tiempos de vida media de 2.96, 1.07, 0.74, 0.5, 0.33 y 0.16 horas a 30, 40, 50, 60, 70 y 80°C respectivamente. Por otro lado, el extracto producido por la cepa 36 a IV tuvo una vida media de1.78, 1.0, 0.8, 0.33, 0.28 y 0.20 a las mismas condiciones de temperatura respectivamente. Debido a que al evaluar la estabilidad térmica no se observó diferencia significativa entre los extractos se continúo trabajando con ambos. Por último, se evaluaron tres inhibidores de proteasas así como también el efecto que tienen ciertos iones metálicos sobre la actividad proteolítica. Con los resultados obtenidos y utilizando los datos anteriores se concluye que la máxima actividad del extracto producido por la cepa 36 aIV puede deberse a la presencia de una cisteín proteasa neutra mientras que para el extracto producido por la cepa 2.2 aB puede deberse a la presencia de una serín proteasa alcalina.
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