Producción y caracterización de lipasas termoestables producidas por fermentación en medio sólido por hongos termófilos - Peña Reyes, Ruth Angélica (Universidad Autónoma Metropolitana, 2012)
La producción de enzimas es de gran interés debido a la importancia industrial que tienen. En la actualidad se ha incrementado el interés en la producción de enzimas termoestables, que puedan ser empleadas en procesos con temperaturas superiores a 45°C. El objetivo del presente trabajo fue seleccionar una cepa termófila productora de lipasas termoestables y caracterizar el extracto enzimático obtenido por fermentación en medio sólido en términos de actividad y estabilidad en función de la temperatura. A partir de 29 cepas fúngicas provenientes de la colección de la U de G se inició una preselección basada en el crecimiento a 50°C, tras la cual fueron seleccionadas 27 cepas. Considerando la producción de lipasas en placas de agar (PDA) con Rodamina B se inició una segunda etapa de preselección, en la que el criterio de selección fue la intensidad del color del halo de hidrólisis. En esta etapa se seleccionaron 10 cepas fúngicas que mostraron una mayor intensidad de la coloración de halo bajo la luz UV (fluorescencia) para analizar su capacidad de producción de lipasas termoestables. A partir de las cepas fúngicas preseleccionadas se evaluó la producción de lipasas en fermentación en medio sólido a tres diferentes temperaturas (40, 45 y 50°C), Se midió la producción de actividad enzimática y se evaluó la estabilidad a 30, 40, 50 y 60°C durante 4 horas, observándose efecto de activación térmica en la mayoría de los extractos. Después de esta etapa se seleccionaron dos cepas (T1.10aB y 3cV s-3 1) para llevar a cabo cinéticas de producción de lipasas por 120 horas, eligiéndose los extractos producidos a las 72 horas a 40°C para evaluar el efecto de la temperatura en la estabilidad y en la actividad enzimática (30-60°C); encontrándose que el extracto producido por la cepa 3cV s-3 1 sufre una mayor activación térmica (350%, a una hora de incubación a 60°C) que el extracto producido por T1.10aB (233% a las 3 horas de incubación a 60°C). Utilizando la ecuación de Arrhenius se calcularon los valores de energía de activación (Ea) y Q10 para ambos extractos, encontrándose que ambos tienen valores de Ea (22.9 y 17.5 KJ/mol) y Q10 (1.23 y 1.20) muy parecidos.