Caracterización de Romo 1 y su relación con la ruta HGF/c-Met en el hígado de ratón (cepa CD1) y la línea celular RIN-m5F - Balderas Morales, Atzin (Universidad Autónoma Metropolitana, 2016)
Redox - mediated s ignaling has emerged as a key mechanism in regulating biological activities of the cell, since reactive oxygen species (ROS) play an important role in numerous physiological and pathological processes. In 2006 it was described Romo1 (modulator Ros 1) prote in, which modulates the levels of ROS, participating significantly in the maintenance of redox homeostasis for cell survival, apoptosis, cell proliferation, carcinogenesis and activation of signaling pathways . Chronic oxidative stress (EOX) - derived ROS pro duced by Romo1 promotes hepatocarcinogenesis (HCC). We decided to study this protein because our previous findings reveal an overproduction of ROS, EOX and an increase in Romo1 protein content in Δc - met mice with an atherogenic diet, suggesting a HGF/c - M et - mediated Romo1 regulation , issue that is porrly addressed . Also this protein has been linked in various diseases that could impact life quality in patients . Methods : It was performed the characterization of Romo1 expression in various CD1 mouse organs. We found that liver has the highest levels in both , mRNA and protein and thus the characterization of hepatic cell lines was performed to confirm this . It was determined the expression of Romo1 in both, mice treated with HGF (20ug / kg) and the pancreatic cell line RIN - M5F. It was performed and confirmed the efficiency of a transient and inducible genetic construct for silencing the gene encoding the protein Romo1, this in order to achieve a controlled study of expression of this protein. Discussion and co nclusions : We found the highest levels of mRNA and Romo1 protein in the liver, as well as in the HepG2 cell line, both findings indicate that Romo1 could have a larger role in liver parenchymal cells of epithelial origin rather than mesenchymal cells, and that may be involved in important physiological processes in the liver. Analysis of HGF treatments in CD1 mouse liver and RIN - M5F cell line suggests that Romo1 undergoes post - transcriptional regulation in response to this factor, so the study of antioxidan t proteins suggested in these treatments. It was possible to obtain the construct to silence the romo1 gene and its efficiency was found; This construction will help in future studies to assess the effect of gene silencing Romo1 in various systems related to liver disease.; La señalización por el estado redox ha emergido como un mecanismo esencial en la regulación de las actividades biológicas de la célula, dado que las especies reactivas de oxígeno (ROS) tienen un papel importante en numerosos procesos tanto fisiológicos com o patológicos. En 2006 se describió la proteína Romo1 (Ros modulator 1), la cual modula los niveles de ROS, participando de manera importante en el mantenimiento de la homeostasis redox para la sobrevivencia celular, apoptosis, proliferación celular, car cinogénesis y activación de vías de señalización. El estrés oxidante (EOX) crónico derivado de las ROS producidas por Romo1 promueve la aparición de hepatocarcinogénesis (HCC). Se considera importante el estudio de esta proteína debido a antecedentes de nu estro laboratorio donde se evaluó el efecto de una dieta aterogénica en ratones Δc - met, se encontró una sobreproducción de ROS, EOX y un incremento en la proteína Romo1, lo que sugiere un control regulatorio de HGF/c - Met sobre la proteína Romo1, y de lo c ual hasta el momento no existen reportes. Además, se ha relacionado a esta proteína con patologías en diversos órganos del ser humano. Métodos. Se realizó la caracterización de diversos órganos de ratón cepa CD1, con respecto a los niveles de RNAm y proteí na Romo1. Se determinó que el hígado tiene los niveles más altos en ambos y por tanto se realizó la caracterización de líneas celulares hepáticas. Se realizaron tratamientos con HGF a ratones (20ug/Kg), y en células RIN - m5F y se determinaron los niveles de RNAm y proteína Romo1. Se realizó y comprobó la eficiencia de una construcción genética transiente e inducible para silenciar al gen que codifica a la proteína Romo1, esto para lograr un estudio controlado de esta proteína. Discusión y conclusiones. En el hígado se encontraron los niveles más altos de RNAm y proteína Romo1, lo cual, junto con el estudio de esta proteína en líneas las líneas celulares estudiadas indican que Romo1 podría tener una mayor relevancia en células del parénquima hepático de origen epitelial más que en células mesenquimales, y que podría estar involucrada en procesos fisiológicos importantes en el hígado. El análisis de los tratamientos con HGF en hígado de ratón CD1 y en la línea celular RIN - m5F sugiere que Romo1 sufre una regulación post - transcripcional en respuesta a este factor, por lo que se sugiere el estudio de las proteínas antioxidantes en estos tratamientos. Se logró obtener la construcción para silenciar el gen romo1, y se comprobó su eficiencia; Esta construcción servirá en estudios posteriores para evaluar el efecto del silenciamiento del gen Romo1 en diversos sistemas estudiados relacionados con hepatopatías.