Estado funcional de la membrana, capacitación in vitro, reacción acrosomal y capacidad de fertilización in vitro de espermatozoides porcinos almacenados en un diluyente de larga duración Público Deposited
La inseminación de cerdas con semen conservado en diluyentes de larga duración a 15-18º C por más de cinco días, resulta en una disminución en la tasa de partos y/o el tamaño de camada, aun cuando los espermatozoides muestran una alta movilidad progresiva. Con el propósito de mejorar este sistema de conservación es necesario comprender la fisiología del espermatozoide diluido. El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto del tiempo de almacenamiento (O, 2, 4, 6, 8 días) de los espermatozoides de cerdo sobre el estado funcional de la membrana y la habilidad para responder a la capacitación in vitro, a la reacción acrosomal inducida con P4 y la capacidad de fertilización in vitro. Se analizaron 10 muestras de semen de cinco cerdos adultos. Dos alícuotas fueron obtenidas de la fracción rica en espermatozoides: una fue utilizada para evaluar el semen fresco y la otra fue diluida en el extensor Reading y almacenada a 16ºC. Las muestras de semen fueron teñidas con clorotetraciclina (CTC) para determinar el estado funcional de la membrana plasmática y con Hoechst 33258 para evaluar la viabilidad. Se prepararon laminillas por duplicado y se contaron 200 células espermáticas por cada preparación observada y el estado funcional de la membrana se determinó según el patrón de tinción con CTC: espermatozoides no capacitados, espermatozoides capacitados y espermatozoides con reacción acrosomal (RA). Adicionalmente, se evalúo la capacidad fertilizante de los espermatozoides almacenados, para ello se realizaron 6 ensayos de FIV y se emplearon 900 ovocitos. Los resultados fueron sometidos a análisis de varianza mixto con mediciones repetidas. Se encontró que el almacenamiento del semen, del cuarto al octavo día, produjo un incremento (p0.05) el porcentaje de espermatozoides capacitados con respecto al tratamiento testigo, pero, si aumentó el porcentaje de espermatozoides reaccionados (p0.05) la proporción de espermatozoides con RA en el semen fresco y diluido en todos los tiempos de almacenamiento. Los ensayos de FIV demostraron que la "capacitación por almacenamiento" no disminuyó la habilidad fertilizante de los espermatozoides bajo condiciones. in vitro. Sin embargo, es muy posible que en programas de IA ésta sea una de las causas que disminuyen la habilidad fertilizante del semen porcino. Palabras clave: Capacitación, clorotetraciclina, conservación de semen, diluyentes de larga duración, espermatozoide porcino, estado funcional de la membrana, reacción acrosomal, fertilización in vitro.
Preservation of porcine semen in long-term extenders at 15 to 18ºC for more than 5 days results in decreased farrowing rates and reduced litter size after artificial insemination (Al), despite high progressive motility rates of sperm. To improve this preservation system it is necessary to understand sperm physiology under storage · conditions. The purpose of this study was to determine the effect of storing diluted porcine semen (during O, 2, 4, 6 and 8 days) on sperm membrane status and the ability of sperm to respond to in vitro capacitation, acrosomal reaction and its capacity to .in vitro fertilization (IVF). Ten semen samples from five adult boars were analysed. Two aliquots were obtained from the sperm rich fraction: one was used to assess fresh semen and the other was diluted in Reading extender and stor.ed at 16ºC. Both semen samples were stained with chlortetracycline to assess the status of sperm membranes, and with Hoechst 33258 to determine viability. Additionally, to evaluate the capacity of in vitro fertilization of stored spermatozoa 6 essays of IVF were made using 900 oocytes from prepuberal gilts. Semen storage far 4, 6 and 8 days increased the proportion of prematurely capacitated sperm (18.7±2.5, 28.8±2.9 and 37.2±3.3 % respectively, p0.05), but increased the percentage of acrosome reacted sperm p0.05), but increased the percentage of acrosome reacted sperm (p0.05). lt was observed that capacitation during storage not reduce the fertilizing ability of spermatozoa (p>0.05). However, it is possible that "storage capacitation" might be one of the causes that decrease the fertilizing ability of porcine semen in Al programs. Key words: Acrosome reaction, boar sperm, capacitation, chlortetracycline, longterm extenders, membrane status, semen preservation, in vitro fertilization.
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