Integración de células de Langerhans en un equivalente cutáneo con base dérmica de fibrina Público Deposited
En la epidermis se localizan las células de Langerhans (CL) que son células presentadoras de antígenos. Es necesario establecer un método de estudio rentable en el cual las CL estén aisladas sin la interferencia de otras células del sistema inmune, para así poder evaluar los procesos tempranos de su respuesta inmunológica. Se han logrado progresos notables en la construcción de sustitutos de piel en el laboratorio mediante ingeniería tisular. La fibrina ha sido utilizada en la construcción de equivalentes cutáneos aprovechando la facilidad con que se obtiene y su interacción con las células dérmicas y epidérmicas. En el presente trabajo se planteó evaluar el potencial de un equivalente cutáneo con base dérmica de fibrina como un posible modelo de estudio de CL. Para lo cual fibroblastos y queratinocitos de ratón fueron extraídos y expandidos en cultivo y se diferenciaron células de médula ósea (MO) de ratón para producir CL y CD. La diferenciación se evalúo por FACS obteniendo células positivas para CD207, MHCII, CD11c, E-cadherina y CD205 que indican un fenotipo de CL, por otro lado la baja expresión de CD80 y CD40 demostró que las células no estaban activadas. Se realizaron pruebas con diferentes concentraciones de plasma (40%, 60 %, 80%, y 80%/Agarosa 0.1%) para evaluar la disminución del volumen del gel de fibrina dando como resultado que el plasma al 80%/Agarosa 0.1% se conserva mejor, aun así, permaneció la perdida del volumen de la fibrina en cultivos con densidades celulares altas. En las muestras que se procesaron para HE y Masson se observó la formación de un epitelio pero este no presentó integridad a lo largo de la superficie del gel. Se injertaron constructos cutáneos con CL sobre la zona dorsal superior de ratones, y estas se procesaron para realizar inmunohistoquímicas para evidenciar MHCII. La expresión de esta molécula en la epidermis indicó la presencia de las CL en la zona del injerto, no obstante los grupos se mantuvieron estadísticamente sin diferencia comparados con el grupo donde solo se sembraron queratinocitos. Por otro lado, CL o CD fueron sembradas con queratinocitos y fibroblastos sin la fibrina para evaluar la capacidad de las células de convivir en cultivo, se les realizó una inmunofluorescencia contra CD207 y se observaron células positivas en los grupos tanto de CL como de CD indicando que las células sembradas pueden adherirse a los cultivos e integrarse con los queratinocitos, así como diferenciarse desde precursores de CD. Estos resultados indican que la fibrina no puede soportar una gran densidad celular ni períodos largos de cultivo, y al mismo tiempo se demostró que es posible diferenciar y mantener CL en co-cultivo con queratinocitos.
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