Optimización de parámetros en fluorescencia para la obtención de valores de pka de la Eosina-Y Público Deposited
En el presente trabajo de maestría se determinaron los valores de pKa de la Eosina-Y, mediante una valoración ácido- base de BrØnsted continua seguida por espectroscopia UV-Visible y por fluorescencia, técnica propuesta para resolver la problemática del equilibrio de precipitación de la lactona quien provoca la discrepancia del valor del pka1. Se utilizó el programa computacional SQUAD para el refinamiento de las constantes. El cálculo de los valores de pKa se realizó a concentraciones de Eosina-Y que pertenecen al intervalo dinámico lineal, determinado por la curva de calibración a pH=4.0±0.1. El intervalo dinámico lineal construido a partir de espectros de absorción a λmax= 515 nm es 5.66x10-6 M<[Eosina-Y]<3.0x10-5M y el perteneciente a partir de espectros de emisión y excitación a λex= 300 nm, 340 nm, 490 nm, 515 nm, 240 nm, 410 nm y 250 nm, y para la única λEm=540 nm, es 5.8x10-8 M<[Eosina-Y]<1.0x10-7M. Las concentraciones de propuesta son 1x10-5 M y 7.5x10-8 M. Sin embargo, a concentraciones mayores a 10-5 se presentó discrepancia del valor de pka1 debido a la precipitación por parte de la especie lactona y el zwitterión en la técnica de UV-Vis, de tal modo que se recurrió a disminuir la concentración a 2.5x10-6 M. Lo que implica que los valores de pka de la Eosina-Y dependen de la concentración. Los valores de pKa se muestran en la tabla siguiente. Los valores de pKa construidos a partir de los espectros de absorción en el intervalo de longitud de onda de 210 nm a 605 nm, son reproducibles y presentan un buen ajuste de los espectros teóricos con los experimentales. El valor del pka1 utilizando los espectros de emisión y excitación, a diferentes longitudes de excitación y emisión ronda entre 2.4 y 2.5. Lo cual confirma el valor obtenido por la técnica de UV-Visible y por tanto es más confiable a comparación con los reportados en la literatura. Se presenta equivalencia entre los valores de pKa obtenidos a partir de λEx=490 y 515nm y excitación a λEm= 540 nm con los obtenidos con los espectros de absorción, considerando un 95% de nivel de significancia, los cuales presentan un mejor ajuste de los espectros teóricos con los experimentales. Por lo tanto, la espectroscopia de fluorescencia es confiable para el cálculo de los valores de pKa.
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